PGR ir realaus laiko PGR
PGR arba polimerazės grandininė reakcija yra modernios molekulinės biologijos atradimas, kurį pirmą kartą sukūrė chemikas Kary Mullis 1983 m. Tai leidžia analizei sustiprinti vieną kompleksinės DNR seką. Pagrindinė PGR idėja yra ta, kad du pradmenys, papildantys priešingas DNR sekos grandines, yra orientuoti vienas į kitą; pradmenys gamina papildomas sruogas, kurių kiekvienoje yra kitas pradas. Taigi rezultatas yra didelis sekos kiekis, atitinkantis DNR, esančią tarp dviejų pradmenų. DNR polimerazės fermentas naudojamas išplėsti pradmenis PGR. DNR polimerazė yra termiškai stabilus fermentas, kuris turi galimybę išgyventi aukštoje temperatūroje (94–95 ° C), naudojamoje DNR matricų denatūravimui.
PGR apima tris etapus, ty pakartotinius denatūravimo etapus, pradmenų atkaitinimą ir DNR sintezę. Šiai reakcijai atlikti naudojama termociklinė mašina, kad būtų galima užprogramuoti greitai ir tiksliai keisti temperatūrą. PGR taikomi kriminaliniai tyrimai, DNR pirštų atspaudai, patogenų aptikimas ir ankstyvųjų žmonių rūšių DNR analizė.
Kas yra įprasta PGR?
Yra trys pagrindiniai įprastinės PGR etapai: DNR amplifikacijos stadija, PGR atskyrimas ir produktų aptikimas. DNR segmentai atskiriami paprastai atliekant agarozės gelio elektroforezę. Tada produktai dažomi etheiduim bromidu. Galiausiai aptikimas pasiekiamas vizualizuojant juostas ant gelių UV spinduliuose. Todėl galutiniai įprastinės PGR rezultatai nėra išreikšti skaičiais. Paprastai įprasta PGR gali aptikti tik vieną parametrą.
Kas yra realaus laiko PGR?
Realaus laiko PGR gali aptikti produktų amplifikaciją, nes produktai yra sintetinami. Tobulėjant technologijoms, PGR tapo labai populiari technika, ypač bakterijose maisto produktuose aptikti ir identifikuoti. Realaus laiko PGR naudojama fluorescuojanti dažų sistema ir termocikleris, turintis fluorescencinio aptikimo galimybę.
Kuo skiriasi įprastinė PGR nuo realaus laiko PGR?
• Įprastinė PGR yra daug laiko reikalaujanti, nes analizuojant pagausėjusius PGR produktus, naudojama elektroforezė su geliu. Priešingai, realaus laiko PGR yra mažiau laiko reikalaujantis, nes jis gali aptikti amplifikacijas ankstyvosiose reakcijos fazėse.
• Realaus laiko PGR renka duomenis eksponentinio PGR augimo fazėje, o tradicinis PGR - duomenis reakcijos galutiniame taške.
• Galutinio PGR rezultatai gali būti nelabai tikslūs, tačiau realiuoju laiku PGR rezultatai yra labai tikslūs.
• Realaus laiko PGR yra jautresnis nei įprastas PGR.
• Įprastinės PGR skiriamoji geba yra labai prasta, o realiuoju laiku PGR gali aptikti labai mažai pokyčių dėl didelės skiriamosios gebos.
• Galutinio taško aptikimas turi įprastą PGR dinaminį diapazoną, o realaus laiko PGR nustatymas turi platų dinaminį diapazoną.
• Skirtingai nuo įprastų PGR, automatinio aptikimo metodai yra randami realiuoju laiku PGR.
• Įprasta PGR yra labai sudėtinga ir reikalaujanti daug darbo nei realiuoju laiku atliekama PGR.
• Skirtingai nuo realaus laiko PGR, įprasta PGR negali atskirti negyvų ir gyvų bakterijų.
• Realaus laiko PGR produktams aptikti naudojama fluorescencinė dažų sistema, o įprastai PGR naudojamas etidžio bromidas ir UV šviesa, kad būtų galima vizualizuoti juostas agarozės gelio terpėje.
