Pagrindinis skirtumas - šiltas ir šaltas tripsinizavimas
Šiltas ir šaltas tripsinizavimas yra du metodai, naudojami fermentiniam ląstelių skaidymui gyvūnų ląstelių kultivavimo procese. Pagrindinis skirtumas tarp šilto ir šalto tripsinizavimo, kaip rodo pavadinimai, priklauso nuo temperatūros, prie kurios tripsinas pridedamas ląstelėms skaidyti. Šiltas tripsinizavimas vyksta esant aukštesnei temperatūrai (36,5 - 37 0 C), o šaltas - žemos temperatūros sąlygomis.
Pirminio gyvūnų ląstelių kultivavimo proceso metu yra naudojami trys pagrindiniai metodai, kurie pasirodė esąs sėkmingi. Šie trys metodai apima mechaninį ląstelių skaidymą, fermentinį ląstelių skaidymą ir pirminę eksplantavimo techniką. Fermentinis ląstelių suskaidymas, lemiantis ląstelių izoliaciją, atliekamas baltymus skaidančio fermento tripsino. Todėl šis procesas yra žinomas kaip tripsinizacija. Trypsinizacija gali būti atliekama dviem skirtingomis sąlygomis, ty šiltuoju ir šaltuoju tripsinizavimu. Šiltas tripsinizacijos yra gydyti ląsteles su tripsino pagal šiltoje aplinkoje esant 36,5 temperatūroje metodas - 37 0C. Šaltasis tripsinizavimas yra tripsino apdorojimo procesas, vykstantis šaltesnėmis sąlygomis, geriausia lede, palaikant labai žemą temperatūrą.
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindiniai skirtumai
2. Kas yra šiltas tripsinizavimas
3. Kas yra šaltasis tripsinizavimas
4. Šilto ir šalto tripsinizavimo panašumai
5. Šoninis palyginimas - šiltas ir šaltas tripsinizavimas lentelių pavidalu
6. Santrauka
Kas yra šiltas tripsinizavimas?
Tripsinizacija gali būti atliekama siekiant išskaidyti ląstelių komponentus, siekiant izoliuoti ląsteles, kad būtų sukurta pirminė ląstelių kultūra. Trypsinas yra baltymų skaidymo fermentas, o fermentų mišinys, naudojamas tripsinizuojant, gali būti žalias ekstraktas arba išgrynintas produktas. Sakoma, kad žalias ekstraktas yra efektyvesnis baltymų lizės ir ląstelių skaidymo metu, nes jame yra kitų skaidančių fermentų.
Šiltas tripsinizavimas yra dažniausiai naudojamas fermentinis ląstelių skaidymo metodas, vykstantis aukštesnėje temperatūroje. Prieš gydymą tripsinizuojant norimas audinys susmulkinamas į mažesnius gabalėlius. Tai palengvina lengvą išskaidymą. Susmulkintas audinys plaunamas specialioje terpėje, vadinamoje „Dissection Basal Dralt“terpe.
Baigus plovimo etapą, ląstelės transformuojamos į kolbą su aktyviuoju fermentu, kuris yra tripsinas. Kaip šis metodas reiškia šiltą tripsinizacijos protokolą, tripsinas yra patalpintas esant maždaug 37 temperatūros 0 ° C temperatūroje maždaug keturias valandas.
01 paveikslas: tripsinas
Turinys sumaišomas ir maišomas taikant centrifugavimo metodus, kad būtų lengviau protokolą ir pagreitinti skaidymo procesą. Pasiekus rekomenduojamą laiką, ląsteles galima gauti iš supernatanto. Tada ląstelės, gautos iš supernatanto, inkubuojamos tam tikroje temperatūroje ir tam tikru laiku.
Kas yra šaltasis tripsinizavimas?
Šaltasis tripsinizavimas yra kita tripsinizacijos rūšis, vykstanti šaltomis sąlygomis. Taikant šią metodą, susmulkintos ir nuplautos ląstelės dedamos į buteliukus ant ledo, o tada mirkomos tripsinu. Mirkymo laikotarpis yra daug ilgesnis - apie 6 - 24 valandas.
Baigus mirkymo procedūrą, tripsinas yra pašalinamas iš ląstelių lizato, ir audinio gabalai yra toliau inkubuojamos 37 0 C temperatūroje apie 20 - 30 minučių. Ląstelės išskaidomos pakartotinai audinių mišinio pipetėmis. Tai leis ląstelėms atsiriboti nuo membranos ir patekti į supernatantą. Kai ląstelės yra supernatante, jos inkubuojamos ir auginamos norimoje temperatūroje ir tam tikru laikotarpiu.
Šaltojo tripsinizavimo metodas turi keletą privalumų
- Didesnis gyvybingų ląstelių derlius, nes sumažėja ląstelių pažeidimai. Ląstelių pažeidimas yra sumažintas nenaudojant centrifugavimo veiksmų.
- Labai patogus metodas.
- Mažiau varginantis.
Pagrindinis šaltojo tripsinizavimo metodo apribojimas yra tas, kad vienu atveju negalima naudoti didelių kiekių.
Kokie yra šilto ir šalto tripsino panašumai?
- Tiek šilto, tiek šalto tripsinizavimo procesuose ląstelių skaidymui naudojamas fermentas tripsinas.
- Ląstelių skaidymo procedūrose ląstelių kultūros procedūrose naudojami ir šilti, ir šalti tripsinizacijos procesai.
- Atliekant šilto ir šalto tripsinizavimo procedūras, ląstelės yra gaunamos iš supernatanto.
Kuo skiriasi šiltas ir šaltas tripsinizavimas?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
Šilta vs šalta tripsinizacija |
|
| Šiltas tripsinizavimas yra būdas gydyti ląsteles tripsinu šiltomis sąlygomis, esant 36,5 - 37 0 temperatūrai. | Šaltasis tripsinizavimas yra tripsino apdorojimo procesas, vykstantis šaltesnėmis sąlygomis, geriausia lede, palaikant labai žemą temperatūrą. |
| Protokolas | |
| Pjaustytų audinio gabalai yra palaikoma 37 0 C nuolat per visą procedūrą. | Pjaustytų audinio gabalai yra iš pradžių palaikoma ledo šaltumo temperatūrai ir po to palaikomas 37 0. |
| Temperatūra | |
| Šilta tripsinizacija vyksta esant 36,5 - 37 0 | Šaltas tripsinizavimas vyksta esant šaltai ledo temperatūrai. |
| Suvartotas laikas | |
| Mažiau laiko reikia visam šiltam tripsinizacijos procesui (apie 4 valandas). | Šaltai tripsinizacijai reikalingas ilgesnis laikas (maždaug 6–24 val.). |
| Gyvybingų ląstelių derlius | |
| Mažai šilto tripsinizavimo. | Daug šalto tripsinizavimo. |
| Centrifugavimo naudojimas | |
| Norint išskaidyti ląsteles šiltoje tripsinizacijoje, reikalingas centrifugavimas. | Centrifuguoti nereikia atliekant šaltą tripsinizaciją. |
| Pradinis audinių kiekis tripsinizacijai | |
| Šiltai tripsinizacijai galima naudoti didesnį audinių kiekį. | Šaltai tripsinizuojant galima naudoti mažesnį audinių kiekį. |
| Ląstelių pažeidimai | |
| Didelis dėl centrifugavimo atliekant šiltą tripsinizaciją. | Mažiau dėl šalto tripsinizavimo. |
Santrauka - šiltas ir šaltas tripsinizavimas
Trypsinizacija yra baltymus skaidančio fermento tripsino panaudojimo būdas pirminėms ląstelių kultūroms skaidyti ir paruošti ląstelių kultivavimo metu. Remiantis procedūros metu naudojamomis temperatūromis, yra du pagrindiniai tripsinizavimo būdai. Jie yra šiltas ir šaltas tripsinizavimas. Šiltas tripsinizacijos yra atliekamas esant 37 0 C kadangi šalto tripsinizacijos atliekamas pagal ledinio sąlygomis. Nors šalta tripsinizacija užtrunka ilgiau, sakoma, kad jos gyvybingų ląstelių derlius yra didesnis. Taip yra dėl to, kad šaltu tripsinizavimu ląstelių pažeidimai yra kuo mažesni, nes nenaudojami intensyvūs centrifugavimo veiksmai. Tai yra skirtumas tarp šilto ir šalto tripsinizavimo.
