Pagrindinis skirtumas - DNR ir RNR išskyrimas
DNR ir RNR tyrimas yra gyvybiškai svarbus aspektas norint suprasti pagrindines molekulinės biologijos, biotechnologijų ir genetikos sąvokas. Norint atlikti eksperimentines procedūras šių tyrimų metu, būtina išgauti grynus DNR ir RNR mėginius. Pagrindinis skirtumas tarp DNR ir RNR išskyrimo yra tas, kad DNR išskyrimo procesas valo DNR, o RNR ekstrahavimas - RNR. DNR išskyrimo procesą sudaro trys skirtingi etapai: ląstelių lizė ir membranos lipidų bei baltymų katabolizmas, katabolitų susikaupimas koncentruotu druskos tirpalu ir DNR nusodinimas etanoliu. Trijų pakopų procedūrą gali sudaryti du neprivalomi etapai. RNR gryninimo procesas susideda iš keturių skirtingų etapų: guanidžio tiocianato pridėjimas ląstelių lizei, baltymų denatūravimas, įskaitant ribonukleazes,RNR atskyrimas pridedant chloroformo ir fenolio ir nuosėdas plaunant etanoliu.
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindinis skirtumas
2. Kas yra DNR išskyrimas
3. Kas yra RNR išskyrimas
4. DNR ir RNR išskyrimo panašumai
5. Šoninis palyginimas - DNR ir RNR išskyrimas lentelių pavidalu
6. Santrauka
Kas yra DNR išskyrimas?
DNR išskyrimas yra fizinis ir cheminis procesas, naudojamas DNR gryninti iš mėginio. DNR išskyrimas yra svarbus aspektas molekulinės biologijos ir teismo medicinos kontekste. Procesas yra trijų pagrindinių žingsnių. Iš pradžių reikėtų gauti dominančias ląsteles. Be to, palengvinama ląstelių lizė, norint suskaidyti ląstelės membraną, kuri atveria ląstelę ir kartu su DNR atskleidžia citoplazmą. Paviršinio aktyvumo medžiagos ar kiti plovikliai gali būti naudojami lipidų lizavimui iš ląstelės membranos, o baltymai yra katabolizuojami proteazių. Tai yra neprivalomas žingsnis. Kai ląstelė lizuojama, katabolizuotų molekulių susikaupimą palengvina koncentruoti druskos tirpalai. Po to centrifuguojamas tirpalas, kuris atskiria šiukšlių sankaupas nuo DNR. Šiame etapediferencijuota DNR sumaišoma su reagentais ir druskomis, naudojamais ląstelių ciklo metu.
01 paveikslas: DNR išskyrimas
Norint jį toliau išgryninti, galima naudoti šiuos veiksmus. Vienas metodas yra nusodinimas etanoliu, kuris apima ledo šalto etanolio sumaišymą su atskirtu DNR mėginiu. DNR netirpi alkoholyje ir dėl to susidaro nuosėdos dėl DNR molekulių agregacijos. Šiame procese pridedamas natrio acetatas, siekiant padidinti kritulių laipsnį padidinant jonų stiprumą. Be etanolio nusodinimo proceso, tam taip pat galima sukelti fenolio ir chloroformo ekstrahavimo procesą. Taikant šį metodą, fenolis denatūruoja mėginyje esančius baltymus. Centrifugavus, denatūruoti baltymai liks organinėje fazėje, o DNR molekulės, sumaišytos su chloroformu, bus vandeninėje fazėje. Chloroformas pašalins fenolio likučius. Baigus gavybą,DNR laikoma ištirpinta TE buferyje arba ypač gryname vandenyje.
Kas yra RNR išskyrimas?
RNR gryninimas yra procesas, kurio metu RNR gryninama iš biologinio mėginio. Dėl ribonukleazės buvimo ląstelėse ir audiniuose šis procesas yra komplikuotas. Ribonukleazės fermentas turi galimybę greitai skaidyti RNR. Ribonukleazių cheminė prigimtis yra ypač stabili, ir jas sunku inaktyvuoti. Neutralizuoti ribonukleazių yra galimybė. Kadangi šis fermentas yra visur ląstelėse ir audiniuose, yra sukurtos specialios RNR ekstrahavimo technologijos. Iš daugelio metodų įprastas metodas yra guanidino tiocinato-fenolio-chloroformo ekstrahavimas.
02 paveikslas: RNR išskyrimas
Guanidinio tiocinato-fenolio-chloroformo ekstrahavimo metodas priklauso nuo centrifugavimo ir fazių atskyrimo. Centrifuguojamą mišinį sudaro vandeninis mėginys ir vandens prisotintas tirpalas, sudarytas iš fenolio ir chloroformo. Centrifugavus, tirpalas susideda iš viršutinės vandeninės fazės ir apatinės organinės fazės neutraliomis pH sąlygomis (pH 7–8). RNR yra vandeninėje fazėje. Organinę fazę paprastai sudaro baltymai, ištirpinti fenolyje, ir lipidai, ištirpinti chloroforme. Pridedama chaotropinio agento (molekulės, gebančios nutraukti vandenilio ryšius tarp vandens molekulių); tai yra žinoma kaip guanidinio tiocianatas. Šis agentas turi galimybę denatūruoti baltymus, tarp kurių yra ribonukleazės, kurios gali suskaidyti RNR ir dalyvauja ląstelių lizėje. Jis taip pat atskiria rRNR nuo ribosomų baltymų. Paskutinis RNR gryninimo etapas yra vandeninės fazės nusodinimo plovimas etanoliu. RNR taip pat būtų galima išvalyti naudojant skystą azotą.
Kokie yra DNR ir RNR išskyrimo panašumai?
- Abiejuose ekstrahavimo procesuose naudojamos kenksmingos cheminės medžiagos, tokios kaip fenolis ir chloroformas.
- Centrifugavimas yra būtina abiejų procesų technika.
- Etanolis naudojamas nuosėdoms plauti ir išgrynintai DNR arba RNR gauti.
Koks skirtumas tarp DNR ir RNR išskyrimo?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
DNR ir RNR išskyrimas |
|
| DNR išskyrimas yra procesas, kuris išskiria DNR iš organizmo ar mėginio. | RNR ekstrahavimas yra procesas, kuris išskiria RNR iš mėginio. |
| Žingsniai | |
| DNR išskyrimo procesas susideda iš trijų skirtingų pakopų su dviem pasirenkamais etapais. | RNR ekstrahavimo procesą sudaro keturi skirtingi etapai. |
| Reagentai | |
| DNR ekstrahavimui naudojamos paviršinio aktyvumo medžiagos, proteazės (nebūtina), alkoholis, chloroformas, fenolis, natrio acetatas. | RNR ekstrahavimui naudojamas guanidio tiocianatas, chloroformas, fenolis, etanolis. |
Santrauka - DNR ir RNR išskyrimas
DNR ir RNR išskyrimas yra gyvybiškai svarbūs molekulinės biologijos, genetikos ir biotechnologijų tyrimo eksperimentinių procedūrų aspektai. Abiejuose procesuose naudojami panašūs reagentai, tačiau RNR ekstrahavimui naudojamas specialus reagentas, žinomas kaip guanidžio tiocianatas, kuris sumažina ribonukleazių aktyvumą. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp DNR ir RNR ekstrahavimo.
Atsisiųskite DNR ir RNR ištraukimo PDF versiją
Galite atsisiųsti šio straipsnio PDF versiją ir naudoti ją neprisijungus, kaip nurodyta citatos pastaboje. Atsisiųskite PDF versiją čia. Skirtumas tarp DNR ir RNR ištraukimo
