Pagrindinis skirtumas - T4 ir T7 DNR ligazė
DNR ligazė yra svarbus fermentas, naudojamas molekulinės biologijos metoduose. Jis veikia kaip molekuliniai klijai, jungiantys nukleotidus, formuojant fosfodiesterinius ryšius tarp nukleotidų. Fosfodiesteriniai ryšiai susidaro tarp cukraus dalies 3'-hidroksilo galo ir 5'-galinės fosfato grupės. DNR ligazė yra gyvybiškai svarbi replikacijos procese, norint prisijungti prie atsiliekančios grandinės Okazaki fragmentų, taip pat atliekant DNR taisymo mechanizmus ir in vitro klonavimo eksperimentus, norint prijungti norimą geną, kuris domina vektoriaus genomą. Šiuo metu molekuliniai biologai naudoja dvi pagrindines DNR ligazes: T4 ir T7 DNR ligazes. T4 DNR ligazė yra vienas iš pirmųjų fermentų, išskiriamų iš T4 bakteriofago. T7 DNR ligazė, kuri yra mažesnis baltymas, yra fermentas, išskirtas iš T7 bakteriofago. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp T4 ir T7 DNR ligazių.
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindiniai skirtumai
2. Koks yra DNR ligazės veiksmas
3. Kas yra T4 DNR ligazė
4. Kas yra T7 DNR ligazė
4. T4 ir T7 DNR ligazės panašumai
5. Greta palyginimas - T4 ir T7 DNR ligazė lentelės forma
6. Santrauka
Koks yra DNR ligazės veiksmas?
DNR perrišimas vyksta trijų pakopų reakcijos metu. Pirmasis žingsnis yra nukleofilinė ataka prieš ATP alfa-fosforą, sukuriant kovalentinį fermento-adenilato tarpinį junginį, kuriame AMP yra susietas su lizino galiniu šoninės grandinės azotu. Antrajame etape įvyksta nukleofilinė ataka prieš fermento-adenilato fosforą, naudojant 5'-fosfatu baigiamą DNR substratą, išskiriant liziną ir formuojant DNR-adenilatą. Paskutiniame etape DNR adenilatą užpuola kitos DNR grandinės 3'-OH, išlaisvindamas AMP ir sujungdamas polinukleotidus.
Kas yra T4 DNR ligazė?
T4 ligazė buvo pirmoji ligazė, kurią išskyrė ir nustatė Meselsonas, Weigle'as ir Kellenbergeris, ir tai buvo pirmoji pagaminta komercinė ligazė. T4 DNR ligazė yra nuo ATP priklausomas fermentas, kuris katalizuoja fosfodiesterio jungties susidarymą. Tai yra viena polipeptido grandinė, turinti 487 aminorūgščių liekanas ir kurios molekulinė masė yra apie 77 kDa. Optimalus jo aktyvumo pH yra nuo 7,5 iki 8.
01 paveikslas: T4 DNR ligazė
T4 DNR ligazės, kaip rodo jos pavadinimas, yra bakteriofage T4 ir ji buvo išskirta, kai fagas gamino fermentą užsikrėtus E. coli. Fermentas susieja dvigubos grandinės DNR dupleksus bukais galais, o surišami fragmentai turėtų būti arti vienas kito.
Kas yra T7 DNR ligazė?
T7 ligazė yra 41 kDa baltymas, kurį gamina T7 bakteriofagas, ir išskiriama užkrėtus E. coli ląsteles. Pagrindinė T7 ligazės funkcija yra perrišti DNR dupleksus per fosfodiesterio jungtis ir klonavimo eksperimentų metu sujungti netoliese esančius DNR fragmentus. Optimalus T7 DNR ligazės pH yra 7,0–7,2. T7 ligazė priklauso nuo ATP. T7 DNR ligazės taip pat gali atkaitinti DNR ir RNR hibridus, todėl transkripcijos metu atsiranda nenormalios konformacijos; tačiau šis reiškinys vis dar tiriamas atliekant in vitro tyrimus.
Kokie yra T4 ir T7 DNR ligazės panašumai?
- T4 ir T7 DNR ligazės dalyvauja ligavimo reakcijoje, atkaitindamos DNR dupleksus, formuodamos fosfodiesterio ryšį tarp DNR fragmento 3 'OH ir 5' fosfato galų.
- Abu fermentai susieja bukus DNR dupleksus, kurie yra arti vienas kito.
- Abu fermentai priklauso nuo ATP.
- Šie fermentai išskiriami infekuojant E. coli ląsteles konkrečiu bakteriofagu.
-
Abiejų fermentų programos apima:
- Molekulinis klonavimas - susieti dominantį geną su vektoriu
- DNR taisymas - taisyti dvigubas nišas
- In vitro DNR replikacija
- Ligazės grandininė reakcija
Koks skirtumas tarp T4 ir T7 DNR ligazės?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
T4 ir T7 DNR ligazė |
|
| T4 DNR ligazės tipo DNR ligazė, išskirta iš bakteriofago T4 ir dalyvaujanti susiejant gretimus DNR fragmentus susidarant fosfodiesterio ryšiui. | T7 DNR ligazės tipo DNR ligazė, išskirta iš bakteriofago T7 ir dalyvaujanti susiejant gretimus DNR fragmentus formuojantis fosfodiesterio ryšiui. |
| Baltymo dydis | |
| T4 DNR ligazės dydis yra 77 kDa - didesnis, palyginti su T7 DNR ligaze. | T7 DNR ligazės dydis yra 41 kDa. |
| Optimalus pH | |
| pH diapazonas, veikiantis T4 DNR ligazę, yra 7,5–8,0. | pH diapazonas, veikiantis T7 DNR ligazę, yra 7,0–7,2. |
Santrauka - T4 ir T7 DNR ligazė
DNR ligazės yra svarbi fermentų klasė, dalyvaujanti molekuliniame klonavime gaminant rekombinantines DNR molekules, kuriose yra dominantis genas. Lyginimo reakcija yra energiją naudojanti reakcija, todėl atliekami nauji tyrimų tyrimai, siekiant pagerinti tikslumą moduliuojant turimas ligazes. T4 ir T7 DNR ligazės yra dviejų tipų svarbūs DNR ligazės fermentai, naudojami molekulinėse biologinėse technikose. T7 DNR ligazė taip pat yra tyrimų, kurie buvo pagrįsti pirmine ligaze, išskirta iš T4 užkrėstos E. coli, rezultatas. Dėl mažesnio dydžio T7 pavaizduotas didesnis efektyvumas ir tikslumas atliekant savo funkciją. Tai yra skirtumas tarp T4 ir T7 ligazės.
Atsisiųskite „T4 vs T7 DNA Ligase“PDF versiją
Galite atsisiųsti šio straipsnio PDF versiją ir naudoti ją neprisijungus, kaip nurodyta citatų pastabose. Atsisiųskite PDF versiją čia Skirtumas tarp T4 ir T7 Ligase.
