Pagrindinis skirtumas - „Nick Translation“ir „Primer Extension“
Slapyvardžio vertimas ir pradmenų pratęsimas yra dvi svarbios molekulinės biologijos metodikos. Pagrindinis skirtumas tarp slapyvardžio transliacijos ir pradmens pratęsimo yra tas, kad slapyvardžio transliacijos procesas sukuria žymėtus zondus kitoms hibridizacijos technikoms, tuo tarpu grunto pratęsimo metodas identifikuoja specifinę RNR seką iš mišinio ir atskleidžia informaciją apie mRNR išraišką. Abi technikos turi didelę reikšmę ir yra įprastai atliekamos molekulinių tyrimų laboratorijose.
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindiniai skirtumai
2. Kas yra „Nick“vertimas
3. Kas yra „Primer Extension“
4. Palyginimas greta - „Nick Translation“ir „Primer Extension“
5. Santrauka
Kas yra „Nick Translation“?
Slapyvardžio vertimas yra svarbi technika, naudojama paruošiant žymėtus zondus įvairioms molekulinėms biologinėms technikoms, tokioms kaip blotavimas, in situ hibridizacija, fluorescencinė in situ hibridizacija ir kt. Tai in vitro DNR žymėjimo metodas. DNR zondai naudojami specifinėms DNR ar RNR sekoms nustatyti. Paženklinto zondo pagalba iš kompleksinio nukleorūgšties mišinio galima pažymėti arba vizualizuoti konkrečius fragmentus. Todėl paženklinti zondai paruošiami naudojant įvairius metodus, kurie bus naudojami skirtingoms technikoms. Slaptasis vertimas yra vienas iš tokių metodų, kuris gamina paženklintus zondus DNazės 1 ir DNR polimerazės 1 fermentų pagalba.
Slapyvardžio vertimo procesas prasideda nuo DNazės 1 fermento aktyvumo. DNazė 1 įterpia įtrūkimus į dvigubos grandinės DNR fosfato pagrindą, skaidydama fosfodiesterinius ryšius tarp nukleotidų. Sukūrus slapyvardį, susidarys laisva 3'OH grupė nukleotido ir jį veiks DNR polimerazės 1 fermentas. 5–3 ’DNR polimerazės eksonukleazinis aktyvumas pašalina nukleotidus nuo slapyvardžio link 3’ DNR grandinės krypties. Tuo pat metu veikia DNR polimerazės 1 fermento polimerazės aktyvumas ir prideda nukleotidų, kad pakeistų pašalintus nukleotidus. Jei nukleotidai buvo paženklinti, pakaitalas įvyko pažymėtais nukleotidais ir jis žymės DNR atpažinimui. Ši naujai susintetinta pažymėta DNR gali būti naudojama kaip zondai įvairiose hibridizacijos reakcijose molekulinėje biologijoje.
01 paveikslas: Nicko vertimo procesas
Kas yra Primer Extension?
Primer pratęsimas yra metodas, naudojamas norint surasti specifinę RNR seką iš RNR mišinio ir nustatyti 5R galą iRNR transkripcijos. Jis taip pat naudojamas RNR struktūrai ir ekspresijai tirti. Grunto pratęsimo metodas atliekamas su pažymėtais pradmenimis arba su pažymėtais nukleotidais. Jei naudojami paženklinti pradmenys, nereikalaujama žymėti nukleotidų, kurie naudojami cDNR sintezei. Šioje technikoje yra keli žingsniai. Tai prasideda RNR ekstrahavimu iš mėginio. Tada į mišinį pridedamas pažymėtas oligonukleotido pradmuo kartu su būtinais ingredientais, norint sintezuoti specifinės RNR sekos cDNR. Gruntas atkuria papildomą seką iš mišinio. Kaip šabloną naudojant grunto atkaitintą seką,fermentas atvirkštinė transkriptazė sintetina RNR sekos komplementinę DNR (cDNR). Pradinis atkaitinimas ir atvirkštinė transkripcija įvyksta tik tada, kai mėginyje yra specifinė RNR seka. Galiausiai, atliekant denatūruojančią gelio elektroforezę, galima nustatyti RNR sekos dydį. Taip pat lengva nustatyti MRT (transkripcijos inicijavimo vietos) sekos +1 bazę grunto išplėtimo metodu. Šiuo metodu galima kiekybiškai nustatyti mėginyje esančios iRNR kiekį, jei naudojamas grunto perteklius. Taip pat lengva nustatyti MRT (transkripcijos inicijavimo vietos) sekos +1 bazę grunto išplėtimo metodu. Šiuo metodu gali būti nustatytas mėginyje esančios mRNR kiekis, jei naudojamas grunto perteklius. Taip pat lengva nustatyti MRT (transkripcijos inicijavimo vietos) sekos +1 bazę grunto išplėtimo metodu. Šiuo metodu galima kiekybiškai nustatyti mėginyje esančios iRNR kiekį, jei naudojamas grunto perteklius.
02 paveikslas: Grunto pratęsimas
Kuo skiriasi „Nick Translation“ir „Primer Extension“?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
„Nick Translation“ir „Primer Extension“ |
|
| Slapyvardžio vertimas yra procesas, sukuriantis žymėtus DNR zondus įvairioms hibridizacijos reakcijoms. | Primer pratęsimas yra technika, naudojama rasti specifinę RNR arba ištirti genų ekspresiją. |
| Naudojami fermentai | |
| Naudojami DNazės 1 ir DNR polimerazės fermentai. | Naudojamas atvirkštinės transkriptazės fermentas. |
| Svarba | |
| Slapyvardžio vertimas palengvina specifinės DNR sekos žymėjimą. | Primer prailginimas leidžia nustatyti specifinį iRNR sekos dydį ir kiekį mėginyje. |
Santrauka - „Nick Translation“ir „Primer Extension“
Niko vertimas yra metodas, naudojamas sintezuoti žymėtus zondus, pagrįstus DNazės 1 ir E coli DNR polimerazės 1 fermentų aktyvumu. Tai yra in vitro metodas, naudojamas laboratorijose prieš taikant skirtingus hibridizavimo metodus. Slapyvardžio transliacijos metu 5'-3 'DNR polimerazės 1 eksonukleazės aktyvumas pašalina nukleotidus prieš niką, o DNR polimerazės 1 polimerazės aktyvumas pašalintus nukleotidus pakeičia žymėtais nukleotidais už niko. Primer pratęsimas yra metodas, naudojamas aptikti specifinį RNR transkriptą iš mišinio ir kiekybiškai įvertinti dominančios RNR dydį ir kiekį. Tai yra skirtumas tarp slapyvardžio vertimo ir pradmenų pratęsimo.
