Pagrindinis skirtumas - SDL puslapis ir savasis puslapis
SDS ir gimtasis puslapis yra dviejų tipų poliakrilamido gelio elektroforezės metodai, naudojami molekulinėje biologijoje. Pagrindinis skirtumas tarp SDS ir „Native Page“yra naudojamas poliakrilamido gelio tipas. SDS Page yra naudojamas denatūruojantis gelis, todėl molekulės yra atskiriamos pagal jų molekulinę masę. Priešingai, „Native Page“yra naudojami nedenatūruojantys geliai. Todėl molekulės yra atskiriamos pagal jų dydį, krūvį ir formą.
Elektroforezei poliakrilamido geliu (puslapis) naudojamas gelis, pagamintas polimerizuojant akrilamido monomerus metileno bisakrilamidu. Poliakrilamidas yra kietesnis ir atsparesnis karščiui nei agarozė. Poliakrilamido geliai turi mažesnį porų dydį, kuris leidžia efektyviai atskirti baltymus. Yra du pagrindiniai puslapių sąrankos tipai: SDS puslapis ir savasis puslapis. SDS Page arba natrio-dodecilsulfato poliakrilamido gelio elektroforezė atskiria baltymus pagal jų molekulinę masę. Denatūruojantys geliai naudojami SDS puslapyje. „Native Page“naudoja nedenatūruojančius gelius ir atskiria baltymus pagal jų dydį, krūvį ir formą (3D konformacija).
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindiniai skirtumai
2. Kas yra SDS puslapis
3. Kas yra vietinis puslapis
4. SDS puslapio ir savojo puslapio panašumai
5. Šoninis palyginimas - SDL puslapis ir savasis puslapis lentelių pavidalu
6. Santrauka
Kas yra SDL puslapis?
SDS puslapis yra labiausiai paplitusi elektroforezės technika, naudojama baltymams atskirti pagal jų molekulinę masę. Gelis gaminamas pridedant SDS (natrio dodecilsulfatas), kuris yra ploviklis. SDS protezuoja baltymus į monomerus. SDS yra anijoninis ploviklis. Todėl jis prideda gryną neigiamą krūvį baltymams plačiame pH diapazone. Kai baltymo molekulėms suteikiamas grynasis neigiamas krūvis, dėl krūvio kitimo, sudėtingos struktūros yra suskaidomos. Dėl neigiamo krūvio baltymai traukia link teigiamos pabaigos. Taigi molekulės, kurių molekulinė masė mažesnė, gelio matricoje keliauja greičiau ir jas galima stebėti arti anodo, o didesnės molekulinės masės baltymai - arčiau šulinių.
01 paveikslas: SDL puslapis
SDS prisijungimas prie polipeptido grandinės yra proporcingas jo santykinei molekulinei masei. Todėl molekulinę masę taip pat galima nustatyti naudojant SDS. SDS Page gelių dažymas atliekamas bromfenolio mėlynuoju dažymu. SDS puslapių taikymo sritis yra didesnė, kur ją galima naudoti norint įvertinti santykinę molekulinę masę ir nustatyti santykinę baltymų gausą baltymų mišinyje. SDS puslapis taip pat gali būti naudojamas baltymų pasiskirstymui baltymų mišinyje nustatyti. SDS puslapis taip pat naudojamas baltymams gryninti ir vertinti. Jis naudojamas kaip išankstinė Western blotting ir hibridizacijos procedūra, kuri savo ruožtu naudojama baltymų kartografavimui ir identifikavimui.
Kas yra vietinis puslapis?
Gimtosios poliakrilamido gelio elektroforezės metu (Native Page) naudojamas nedenatūruojantis gelis. Todėl SDS ar bet koks kitas denatūruojantis agentas nėra pridedamas prie gelio matricos. Gimtojoje puslapyje baltymų atskyrimas pagrįstas krūviu ir baltymo dydžiu. Todėl baltymo mobilumas priklauso nuo krūvio ir baltymo dydžio.
Baltymų krūvis priklauso nuo aminorūgščių šoninių grandinių. Jei šoninės grandinės yra neigiamai įkrautos, baltymai gaus bendrą neigiamą krūvį ir atvirkščiai. Baltymai išlaiko 3D konformaciją dėl vykstančio sulankstymo. Lankstymasis atsiranda dėl kelių baltymų jungčių tipų, tokių kaip disulfidiniai ryšiai, hidrofobinės sąveikos ir vandenilio jungtys. Todėl, jei gimtasis puslapis nešamas neutraliu pH, baltymai bus atskirti pagal baltymo molekulinę formą. Todėl „Native Page“galima naudoti kaip jautrią techniką baltymo krūvio ar konformacijos pokyčiams nustatyti.
Pagrindinis gimtojo puslapio privalumas yra tai, kad puslapio analizei naudojamą baltymą galima atgauti pradinėje būsenoje po puslapio analizės, nes proceso metu baltymai nėra sutrikdyti. Gimtoji Pusė yra gana didelio našumo technika, todėl padidėja baltymo stabilumas.
02 paveikslas: gimtasis puslapis
Užbaigus gelio tyrimą, „Native Page“gelis gali būti matomas dažant bromfenolio mėlynuoju ar kitu tinkamu dažymo reagentu. „Native Page“programa apima rūgščių baltymų, įskaitant glikoproteinus, tokius kaip žmogaus rekombinantinis eritropoetinas, atskyrimą arba baltymų, esančių galvijų serumo albumine (BSA), identifikavimą.
Kuo panašūs SDS puslapis ir savasis puslapis?
- Tiek SDS Page, tiek „Native Page“sistemose poliakrilamido gelis naudojamas kaip gelio matrica.
- Abu jie naudojami baltymams atskirti ir identifikuoti.
- Junginiams atskirti naudojami elektroforezinis judrumas.
- Abi gali būti atliekamos vertikaliai arba horizontaliai (dažniausiai atliekamos kaip vertikalios puslapio sąrankos, nes vykdymo ilgis yra didesnis).
- Elektroforezės aparatas, įskaitant gelio baką, šukas, maitinimo šaltinis reikalingas abiem technikoms veikti.
- Gelis gali būti vizualizuojamas abiejų metodų dažymo metodais.
Kuo skiriasi SDL puslapis ir savasis puslapis?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
SDL puslapis ir savasis puslapis |
|
| SDS puslapis arba natrio dodecilsulfato puslapis atskiria baltymus pagal jų molekulinę masę ir naudoja denatūruojantį gelį. | „Native Page“naudoja nedenatūruojančius gelius ir atskiria baltymus pagal jų dydį, krūvį ir formą (3D konformacija). |
| Gelio tipas | |
| SDS puslapyje naudojamas denatūruojantis gelis. | Gimtame puslapyje naudojamas nedenatūruojantis gelis. |
| SDL buvimas | |
| SDS yra kaip ploviklis, kad SDS puslapyje pavyzdys būtų neigiamas. | SDS nėra savajame puslapyje. |
| Atskyrimo pagrindas | |
| Baltymų atskyrimas priklauso nuo baltymų molekulinės masės SDS puslapyje. | Atskyrimas priklauso nuo baltymo molekulės dydžio ir formos gimtajame puslapyje. |
| Baltymų stabilumas | |
| SDS puslapyje baltymų stabilumas yra mažas. | Gimtame puslapyje baltymų stabilumas yra didelis. |
| Pradinio baltymo susigrąžinimas | |
| Neįmanoma, nes jis yra denatūruotas SDL puslapyje. | Galima gimtajame puslapyje. |
Santrauka - SDL puslapis ir savasis puslapis
SDS puslapis ir „Native Page“yra dviejų tipų poliakrilamido gelio elektroforezės metodai, naudojami baltymams atskirti. SDS puslapis apdorojamas plovikliu, vadinamu SDS. SDS suteikia baltymui bendrą neigiamą krūvį, kuris lemia baltymo denatūraciją. Todėl baltymai yra atskiriami pagal jų molekulinę masę. Priešingai, „Native Page“technika nenaudoja jokių denatūratorių. Taigi baltymai arba atskiriami, atsižvelgiant į jų dydį arba formą. Tai yra skirtumas tarp SDS puslapio ir savojo puslapio.
