Pagrindinis skirtumas - SDL puslapis ir „Western Blot“
Western blot yra metodas, kuris nustato baltymo mėginio specifinį baltymą. Ši technika atliekama keliais pagrindiniais etapais: elektroforezė geliu, blotavimas ir hibridizacija. Natrio dodecilsulfato poliakrilamido gelio elektroforezė (SDS puslapis) yra tam tikra gelio elektroforezės technika, naudojama baltymams atskirti pagal jų dydį (molekulinę masę). Western blot yra specialus blotingo membranos lakštas, naudojamas perkelti tą patį baltymų modelį SDS puslapyje. Pagrindinis skirtumas tarp SDS puslapio ir „Western blot“yra tas, kad SDS puslapis leidžia atskirti baltymus mišinyje, o „Western blot“- nustatyti ir kiekybiškai įvertinti konkretų baltymą iš mišinio. Abi yra naudingos atliekant baltymų analizę.
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindiniai skirtumai
2. Kas yra SDS puslapis
3. Kas yra „Western Blot“
4. Palyginimas kartu - SDS puslapis ir „Western Blot“
5. Santrauka
Kas yra SDL puslapis?
SDS Page yra gelio elektroforezės technika, naudojama baltymams atskirti. Jis paprastai naudojamas biochemijoje, genetikoje, kriminalistikoje ir molekulinėje biologijoje. Iš mėginio ištraukus baltymus, jie paleidžiami geliu, sudarytu iš SDS ir poliakrilamido. SDS yra anijoninis ploviklis, naudojamas baltymams (denatūruojantiems baltymams) linearizuoti ir linearizuotiems baltymams sukelti neigiamą krūvį, proporcingą jų molekulinei masei. Poliakrilamidas tampa tvirta gelio atrama. Neigiamai įkrauti denatūruoti baltymai per gelį migruoja į teigiamą aparato galą. Pagal baltymų dydžius migruojantis greitis skiriasi baltymams ir vyksta išsiskyrimas. Todėl SDS puslapis yra naudingas atskiriant atskirus baltymus pagal jų dydžius.
Poliakrilamido gelio paruošimas baltymų frakcionavimui yra esminis SDS žingsnis. Teisinga poliakrilamido koncentracija ir naudojamo kryžminio jungiklio tipas stipriai veikia fizines gelio savybes, dėl kurių faktiškai skiriasi skirtingi baltymai. Norint veiksmingai atskirti, reikia tinkamai nustatyti gelio porų dydį. Tačiau SDS puslapis laikomas didelės skiriamosios gebos baltymų atskyrimo technika.
SDS puslapio technika turi pagrindinį baltymų analizės apribojimą. Kadangi SDS prieš atskiriant denatūruoja baltymus, tai neleidžia aptikti fermentinio aktyvumo, sąveikos su baltymais, baltymų kofaktorių ir kt.
01 paveikslas: SDL puslapis
Kas yra „Western Blot“?
Western blot technika leidžia nustatyti specifinį baltymą iš baltymų mišinio ir išmatuoti baltymo kiekį ir molekulinę masę. Western blot yra membrana, naudojama blotavimo procedūros metu, norint gauti baltymų modelių veidrodinį vaizdą SDS- poliakrilamido gelyje. Vakarų blotavimui naudojama membrana dažniausiai susideda iš nitroceliuliozės arba polivinilideno difluorido (PVDF). Norint nustatyti norimą baltymą, galima naudoti membraną su perneštu baltymu. Norint nustatyti hibridizaciją norimam baltymui, reikia aukštos kokybės antikūnų. Antikūnas jungiasi prie savo specifinio antigeno ir atskleidžia norimo antigeno, kuris yra baltymas, buvimą.
Baltymai iš SDS poliakrilamido gelio perkeliami į Western blotą atliekant elektroblotingą. Tai veiksmingas ir greitas metodas, dėl kurio baltymai elektroforuojasi iš gelio ir patenka į nitroceliuliozės membraną (Western blot).
02 paveikslas: Western Blot
Kuo skiriasi SDS puslapis ir „Western Blot“?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
SDS puslapis ir „Western Blot“ |
|
| SDS puslapis yra gelio elektroforezės technika. | Western blot yra metodas, atliekamas membranoje, siekiant nustatyti specifinį baltymą iš mišinio. |
| Naudokite | |
| SDS puslapis leidžia atskirti baltymus pagal jų dydžius. | Western blot leidžia pernešti baltymus į SDS puslapio gelį, nekeičiant jo modelio, ir leidžia hibridizuotis su specifiniais antikūnais. |
| Trūkumai | |
| Baltymų denatūravimas, brangumas ir neurotoksinių chemikalų buvimas yra šios technikos trūkumai. | Ši technika užima daug laiko ir reikalauja gerai patyrusių asmeninių ir specifinių kontroliuojamų sąlygų. |
Santrauka - SDS puslapis ir „Western Blot“
SDS puslapis ir „Western blot“yra du baltymų analizės metodai. SDS Page leidžia lengvai atskirti baltymus ant gelio pagal jų molekulinę masę. Western blot padeda patvirtinti specifinio baltymo buvimą ir kiekį hibridizuojantis su specifiniais antikūnais. Tai yra skirtumas tarp SDS puslapio ir „Western blot“.
