Pagrindinis skirtumas - YAC vs M13 Phage Vector
DNR klonavimas yra svarbus procesas, leidžiantis dauginti svarbius organizmų DNR fragmentus. Norint sukurti rekombinantinę DNR, kuri transformuojasi į organizmą-šeimininką, reikia sujungti specifinę DNR su vektorine DNR. Vektorius yra DNR molekulė, kuri elgiasi kaip priemonė pernešti svetimą genetinę medžiagą į kitą ląstelę ar organizmą. Jis turėtų sugebėti replikuotis organizmo-šeimininko viduje ir gaminti kelias rekombinantinės DNR kopijas. DNR klonuojant naudojami įvairūs vektoriai. Mielių dirbtinė chromosoma (YAC) ir M13 fago vektorius yra du jų tipai. Pagrindinis skirtumas tarp YAC ir M13 fago vektoriaus yra tas, kad YAC yra dirbtinė chromosoma, kuri replikuojasi mielių ląstelėse, o M13 fago vektorius yra viengrandė žiedinė M13 bakteriofago DNR, kuri replikuojasi E Coli ląstelėse.
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindiniai skirtumai
2. Kas yra YAC
3. Kas yra M13 fago vektorius
4. Šoninis palyginimas - YAC ir M13 fago vektorius
5. Santrauka
Kas yra YAC vektorius?
YAC yra dirbtinai sukurta chromosoma, galinti pernešti didelį kiekį svetimos DNR ir daugintis mielių ląstelėse. Jis turi centromeras, telomerą ir autonomiškai replikuojančias sekas, būtinas replikacijai ir stabilumui. YAC taip pat turėtų turėti selektyvų žymeklį arba žymenis ir restrikcijos vietas, kad jis taptų efektyviu klonavimo vektoriu. Didelės sekos, svyruojančios nuo 1000 kb iki 2000 kb, gali būti įterptos į YAC ir perkeltos į mieles.
01 paveikslas: YAC vektorius
Kas yra M13 Phage Vector?
Bakteriofagas M13 yra virusas, kuris užkrečia ir dauginasi E Coli. M13 bakteriofago genomas yra mažo dydžio, apie 6,7 kb. Tai yra viengrandė, žiedinė ir teigiamo jutimo DNR. Šis virusas specialiai užkrečia E Coli bakterijas per F pilus. Patekęs į ssDNR į bakteriją, jis sintetina savo komplementarią grandinę ir tampa dsDNR arba M13 replikacine forma (RF). RF gali elgtis kaip plazmidė organizmo-šeimininko organizme. DsDNR dauginasi E Coli ir gamina ssDNR su naujais fagais. Šie nauji fagai nuolat išsiskiria iš „E Coli“, nežudant ląstelės šeimininkės. Tačiau infekcija sulėtina E Coli augimą. dsDNR galima išskirti iš bakterijų ląstelių ir naudoti kaip vektorius DNR klonuojant. Jie yra žinomi kaip M13 fago vektoriai. Jais galima lengvai manipuliuoti ir naudoti panašiai kaip plazmidžių vektoriuose.
Šių M13 fagų būdingas infekcijos gebėjimas yra gera kvalifikacija, kurią reikia naudoti kaip vektorių genų klonavimui. Kuriant M13 į vektorių, į jo genomą reikia įtraukti keletą elementų. Jie yra lac repressoriaus (lac I) baltymo genas, lac Z geno operatoriaus proksimalinis regionas, lac promotorius ir daugkartinė klonavimo vieta (polilinkeris). Kai M13 dsDNR naudojama kaip vektorius, ji gali būti traktuojama kaip plazmidės vektorius. Tačiau ssDNR M13 naudojimas turi pranašumų nustatant DNR seką ir nukreipiant mutagenezę į vietą.
Kadangi M13 fago vektorius turi daugybę klonavimo vietų lacZ regione, rekombinuotus vektorius galima lengvai atpažinti atliekant mėlynos / baltos kolonijos tyrimą agaro plokštelėse, kuriose yra IPTG ir X-Gal. Ant plokščių pagamintose mėlynose plokštelėse nėra rekombinuotų fagų. Todėl klonavimo tikslu galima pasirinkti fagus su įdėklais.
02 pav. Bakteriofagas M13
Kuo skiriasi YAC ir M13 Phage Vector?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
„YAC“ir „M13 Phage Vector“ |
|
| YAC yra genų inžinerijos būdu sukurta chromosoma, galinti pernešti didelį kiekį svetimos DNR ir daugintis mielių ląstelėse. | M13 fago vektorius yra bakteriofago M13 sukurtas virusinis vektorius, naudojamas svetimoms DNR įterpti į E Coli. |
| Tikslas | |
| YAC buvo sukurti klonuoti didelius genomo DNR fragmentus į mieles. | M13 fago vektoriai naudojami svetimai DNR įterpti į E Coli. |
| Įterpimo ilgis | |
| YAC gali būti megabazės dydžio genomo intarpai (1000 kb - 2000 kb). | Įdėklų dydis yra apie 1500 bps. |
| Statyba | |
| YAC DNR sunku išvalyti nepažeistą, todėl norint sukurti YAC vektorių sistemą, reikia didelės koncentracijos. | Tai vyksta per ciklinę fotosintezės elektronų grandinę. |
| Stabilumas | |
| YAC yra nestabilus. | M13 fagus galima lengvai išgauti. |
| Dydis | |
| Fermentai yra didesnės molekulės. | M13 fagai yra stabilūs nei YAC. |
Santrauka - YAC vs M13 Phage Vector
YAC yra dirbtinai sukonstruota vektorių sistema, naudojant specifinį mielių chromosomos regioną, kad į mielių ląsteles būtų įterpti dideli genetinės medžiagos segmentai. M13 fago vektorius yra vektoriaus sistema, gaunama iš bakteriofago M 13, kuri naudoja E coli kaip organizmą-šeimininką. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp YAC ir M13 Phage Vector. Abi yra vienodai naudingos rekombinantinei DNR technologijai ir genų klonavimui.
