Pagrindinis skirtumas - gelinė elektroforezė ir SDS puslapis
Gelio elektroforezė yra metodas, kuris atskiria makromolekules elektriniame lauke. Tai yra įprastas molekulinės biologijos metodas atskirti DNR, RNR ir baltymus iš mišinių pagal jų molekulinius dydžius. SDS Page yra elektroforezės tipo gelis, naudojamas baltymams atskirti nuo baltymų mišinio pagal jų dydį. Gelio elektroforezė yra terminas, vartojamas norint apibūdinti įprastą DNR, RNR ir baltymų atskyrimo metodiką, o SDS Page yra vienos rūšies gelio elektroforezė. Tai yra pagrindinis gelio elektroforezės ir SDS skirtumas.
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindiniai skirtumai
2. Kas yra gelio elektroforezė
3. Kas yra SDS puslapis
4. Palyginimas greta - elektroforezė su geliu ir SDS
5. puslapis
Kas yra gelio elektroforezė?
Gelio elektroforezė yra įprasta metodika, naudojama laboratorijose atskiriant įkrautas molekules, tokias kaip DNR, RNR, baltymai ir kt., Nuo jų mišinių. Elektroforezės metu naudojamas gelis. Jis veikia kaip molekulinis sietas. Gelio elektroforezėje naudojami dviejų tipų geliai, būtent agarozė ir poliakrilamidas. Gelio parinkimas ir gelio preparatas yra svarbūs veiksniai, į kuriuos reikia atsižvelgti atliekant elektroforezes gelyje, nes gelio porų dydį reikia kruopščiai valdyti, kad elektroforezės būdu būtų galima gerai atskirti molekules. Gelio elektroforezė turi elektrinį lauką, sujungtą su dviem gelio galais. Vienas gelio galas rodo teigiamą krūvį, o kitas - neigiamai.
DNR ir RNR yra neigiamai įkrautos molekulės. Įkėlus juos į gelį nuo neigiamo gelio galo ir pritaikius elektriniam laukui, jie gelio poromis migruoja link teigiamai įkrauto gelio galo. Migracijos greitis priklauso nuo krūvio ir molekulės dydžio. Mažesnės molekulės lengvai migruoja per gelio poras nei didesnės molekulės. Vadinasi, mažesnės molekulės per gelį keliauja dideliu atstumu, o didesnės - trumpu atstumu. Norint stebėti molekulių judėjimą gelyje, naudojami specialūs dažiklių tipai. Elektrinis laukas yra naudojamas tam tikrą laiką ir sustabdomas, kad būtų išvengta molekulių praradimo ir kad molekulės būtų laikomos jose. Gelyje galima pastebėti skirtingas juostas. Šios juostos žymi skirtingo dydžio molekules. Taigi,elektroforezė geliu yra naudinga diferencijuoti molekules pagal jų dydį.
Gelio elektroforezė yra įtraukta į įvairius metodus kaip parengiamąją molekulinės biologijos metodiką, pvz., PGR, RFLP, klonavimą, DNR sekos nustatymą, Southern blotting, genomo kartografavimą ir kt.
01 pav. Agarozės gelio elektroforezė
Kas yra SDL puslapis?
Natrio dodecilsulfato poliakrilamido gelio elektroforezė (SDS puslapis) yra gelio elektroforezės rūšis, naudojama baltymams atskirti. Kai baltymų atskyrimui naudojama elektroforezė su geliu, reikia specialaus gydymo, nes baltymai nėra neigiamai įkrauti, pvz., DNR ir RNR, o ne migruoja link teigiamos ar neigiamos pabaigos. Taigi prieš gelio elektroforezę baltymai denatūruojami ir padengiami neigiamu krūviu. Tai atliekama naudojant ploviklį, vadinamą natrio dodecilsulfatu (SDS). Elektroforezė su geliu, kurioje palaikomajai terpei naudojama SDS ir poliakrilamido gelis, yra žinoma kaip SDS. Ši technika dažniausiai naudojama biochemijoje, genetikoje, kriminalistikoje ir molekulinėje biologijoje.
SDS Page metu baltymai sumaišomi su SDS. SDS išskleidžia baltymus tiesine forma ir padengia juos neigiamu krūviu, proporcingu jų molekulinei masei. Dėl neigiamo krūvio baltymų molekulės migruoja link teigiamo gelio krūvio galo ir išsiskiria pagal savo molekulines mases. SDS puslapyje poliakrilamidas naudojamas kaip kieta gelio atrama. Faktinis baltymų išsiskyrimas daugiausia priklauso nuo gelio savybių. Todėl reikia kruopščiai paruošti poliakrilamido gelį ir naudoti tinkamą poliakrilamido koncentraciją. Poliakrilamido geliai yra didelės skiriamosios gebos nei agarozės geliai. Taigi SDS puslapis yra laikomas didelės skiriamosios gebos baltymų atskyrimo technika.
SDS puslapis yra denatūruojančios gelio elektroforezės tipas. Tai labai riboja baltymų analizę. Kadangi SDS prieš atskiriant denatūruoja baltymus, tai neleidžia aptikti fermentinio aktyvumo, sąveikos su baltymais, baltymų kofaktorių ir kt.
02 paveikslas: SDL puslapis
Kuo skiriasi gelinė elektroforezė ir SDS puslapis?
Gelio elektroforezė ir SDS |
|
| Gelio elektroforezė yra metodas, skirtas atskirti makromolekules naudojant elektrinį lauką. | SDS Page yra aukštos skiriamosios gebos gelio elektroforezės metodas, naudojamas baltymams atskirti pagal jų masę. |
| Gelio bėgimas | |
| Tai gali būti atliekama horizontaliai arba vertikaliai. | SDS puslapis visada veikia vertikaliai. |
| Išsiskyrimo pagrindas | |
| Atskyrimas vyksta pagal krūvį ir dydį. | Baltymai atskiriami pagal masę ir krūvį. |
| Rezoliucija | |
| Agarozės gelio elektroforezė turi mažą skiriamąją gebą, o poliakrilamido gelio elektroforezė - didesnę skiriamąją gebą | SDS puslapio skiriamoji geba yra geresnė. |
| Denatūracija | |
| Gelio elektroforezė apima ir denatūravimo, ir nedenatūravimo metodus. | SDS puslapis prieš atskiriant denatūruoja baltymus. |
Santrauka - Gelio elektroforezė ir SDS puslapis
Gelio elektroforezė yra įprasta technika, naudojama atskiriant ir analizuojant DNR, RNR ir baltymus, atsižvelgiant į jų dydį ir krūvį. Yra dvi pagrindinės gelio elektroforezės rūšys: agarozės gelio elektroforezė ir poliakrilamido gelio elektroforezė. Agarozės geliai daugiausia naudojami nukleino rūgščių atskyrimui; kai reikalinga didesnė skiriamoji geba, naudojami poliakrilamido geliai. SDS puslapis yra elektroforezės tipo gelis, paprastai naudojamas atskirti sudėtingus baltymų mišinius. Tai laikoma didelės skiriamosios gebos baltymų atskyrimo technika. Tai yra gelio elektroforezės ir SDS skirtumas.
