Pagrindinis skirtumas - Taq polimerazė ir DNR polimerazė
DNR polimerazė yra fermentas, kuris sukuria naują DNR iš savo statybinių blokų (nukleotidų). Prokariotuose ir eukariotuose yra skirtingų tipų DNR polimerazių. DNR dubliavimasis yra įmanomas dėl šių specialių fermentų buvimo, o genetinė informacija palikuonims perduodama veikiant DNR polimerazėms. Taq polimerazė yra specialus DNR polimerazės tipas, kuris yra stabilus ir yra plačiai naudojamas PGR. Taq polimerazė yra termofilinėse bakterijose ir išgryninta in vitro DNR replikacijos metu. Esminis skirtumas tarp Taq polimerazės ir DNR polimerazės yra tas, kad Taq polimerazė gali atlaikyti aukštą temperatūrą nedenatūruodama, o kitos DNR polimerazės denatūruojamos aukštoje temperatūroje (esant baltymų skilimo temperatūrai).
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindiniai skirtumai
2. Kas yra Taq polimerazė
3. Kas yra DNR polimerazė
4. Palyginimas greta - Taq polimerazė ir DNR polimerazė
5. Santrauka
Kas yra „Taq Polymerase“?
Taq polimerazė (Taq DNR polimerazė) yra fermentas, naudojamas DNR sintezuoti in vitro PGR metodu. Jį gamina termofilinė bakterija, vadinama „Thermus aquaticus“, kuri gyvena karštuose šaltiniuose ir terminėse angose. Taq polimerazė yra termiškai stabilus fermentas, kuris nesuyra esant aukštai temperatūrai. Taq polimerazė pirmą kartą buvo išgryninta ir paskelbta Chien et al. PCR technika atliekama naudojant Taq polimerazę dėl jos gebėjimo toleruoti aukštą temperatūrą ir temperatūros svyravimus PGR metu. Taq polimerazė katalizuoja DNR sintezę, kai yra pradmenų, nukleotidų ir viengrandės matricos DNR. Fermentas susideda iš vieno polipeptido, kurio molekulinė masė yra maždaug 94 kDa. Taq polimerazė pasižymi optimaliu aktyvumu 80 ° C temperatūroje ir esant 7–8 pH diapazonui, esant magnio jonams. Jis turi ir polimerazės, ir egzonukleazės aktyvumą. Fermentą sudaro viena polipeptido grandinė, o Taq polimerazės gene yra didelis G ir C kiekis (67,9%).
Termostabili Taq polimerazė leidžia atlikti PGR aukštoje temperatūroje, kuri padidina pradmenų specifiškumą ir sumažina nepageidaujamų PGR produktų (pradmenų dimerų) susidarymą. Taq polimerazė taip pat pašalina poreikį pridėti naujų fermentų į PGR reakciją po kiekvieno PGR reakcijos ciklo, nes ji gali atlaikyti aukštą temperatūrą. Taq polimerazės atradimas leido PGR atlikti viename uždarame mėgintuvėlyje, palyginti paprastoje mašinoje. Dėl šių Taq polimerazės savybių PGR tampa populiari įprasta laboratorijos technika atliekant daugelį molekulinės biologijos analizių, susijusių su DNR analize.
Taq polimerazė yra plačiai naudojama molekulinėse biologinėse technikose, todėl reikia didelio masto Taq polimerazės gamybos. Todėl, naudojant rekombinantinę DNR technologiją ir genų klonavimą, Taq DNR polimerazę kodavęs genas buvo klonuotas ir išreikštas Escherichia coli. Tai labai palengvino rekombinantinės Taq polimerazės gamybą ir sumažino šio fermento kainą už tinkamą naudojimą.
1 paveikslas: Taq polimerazė
Kas yra DNR polimerazė?
DNR polimerazė yra fermentas, kuris katalizuoja DNR sintezę iš nukleotidų. Tai tiksliausias fermentas, atsakingas už genomų dubliavimąsi ir genetinės informacijos perdavimą palikuonims. Ląstelių dalijimosi metu DNR polimerazė dubliuoja visą savo DNR ir vieną kopiją perduoda kiekvienai dukterinei ląstelei. 1955 m. Arthur Kornberg atrado DNR polimerazę E Coli. DNR polimerazės funkcija priklauso nuo kelių reikalavimų; matricinė DNR, Mg +2 jonai, visi keturi deoksinukleotidų tipai (dATP, dTTP, dCTP ir d GTP) ir trumpa RNR seka (pradmuo). DNR sintezė atliekama DNR polimerazės kryptimi nuo 5'iki 3 '.
DNR polimerazes galima sugrupuoti į septynias skirtingas šeimas: A, B, C, D, X, Y ir RT (atvirkštinė transkriptazė). Retrovirusai koduoja RT; neįprasta DNR polimerazė, kuriai DNR sintezei reikia RNR šablono. Yra penkios skirtingos DNR polimerazių rūšys, randamos prokariotuose, skirtingiems vaidmenims DNR replikacijoje. DNR polimerazė 3 yra atsakinga už naujos DNR grandinės polimerizaciją. 1 DNR polimerazė yra atsakinga už DNR taisymą ir lopymą. 2, 4 ir 5 DNR polimerazės yra atsakingos už DNR taisymą ir korektūrą. Eukariotuose yra 15 skirtingų tipų DNR polimerazių. Juose yra penkios pagrindinės šeimos.
2 paveikslas: DNR polimerazė
DNR polimerazės yra naudojamos genų klonavimui, PGR, DNR sekos nustatymui, SNP aptikimui, molekulinei diagnostikai ir kt. Taq polimerazė yra viena iš tipų DNR polimerazės, kuri gali toleruoti aukštą temperatūrą ir būti prieinama DNR sintezei neskaidant.
Koks skirtumas tarp Taq polimerazės ir DNR polimerazės?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
Taq polimerazė ir DNR polimerazė |
|
| Taq DNR polimerazė yra fermentas, kuris sukuria DNR. Tai yra termofiluose esantis termostabilus fermentas | DNR polimerazė yra fermentas, palengvinantis DNR replikaciją ir randamas tiek prokariotiniuose, tiek eukariotiniuose organizmuose. |
| Skilimas esant aukštai temperatūrai | |
| Taq polimerazė yra aktyvi esant aukštai temperatūrai. | DNR polimerazės suyra baltymuose, denatūruojančiuose aukštą temperatūrą. |
| Naudokite | |
| Tai plačiai naudojama PGR | Taq polimerazė pakeitė DNR polimerazę iš kolių, iš pradžių naudojamus PGR. |
Santrauka - Taq polimerazė ir DNR polimerazė
DNR polimerazės yra fermentai, sintetinantys DNR iš deoksinukleotidų (statybinių DNR blokų), kai yra šablonas ir pradmenys. DNR polimerazės reikalingos ląstelių DNR dubliuoti ir ląstelių dalijimosi metu pereiti į tapačias dukterines ląsteles. DNR polimerazės prideda naujų nukleotidų į pradmens 3 ’galą ir pailgina naujos DNR grandinės sintezę nuo 5 'iki 3' krypties. Taq DNR polimerazė yra vienas iš DNR polimerazės fermentų, kuris yra labai naudingas atliekant polimerazės grandinės reakcijos (PGR) DNR amplifikacijos metodą. E. coli DNR polimerazė 1 buvo naudojama anksčiau atliekant PGR, tačiau komercinė Taq polimerazė ją išstūmė dėl didelio grunto susiejimo specifiškumo aukštoje temperatūroje ir didesnio norimo produkto su mažiau nespecifiniu amplifikacijos produktu išeities. Tai yra skirtumas tarp Taq polimerazės ir DNR polimerazės.
