Pagrindinis skirtumas - tiesioginis ir netiesioginis ELISA
Su fermentais susijęs imunologinis tyrimas (ELISA), dar vadinamas imunofermentiniu fermentu, yra serologinis tyrimas, kurio metu nustatomi antikūnai kraujyje. Jis naudojamas kaip diagnostinė priemonė siekiant išsiaiškinti, ar pacientas buvo paveiktas tam tikro tipo viruso ar kito infekcijos sukėlėjo (antigeno) ir ar organizmas pagamino antikūnų prieš infekciją. ELISA taip pat gali nustatyti praeities ir dabartines infekcijas. Taigi prieš nuodugnią ligų analizę gydytojai ELISA dažnai naudoja kaip išankstinio atrankos testą. Šį tyrimą galima atlikti laboratorijoje paėmus paciento kraujo mėginį. Yra dviejų tipų ELISA testas: tiesioginis ELISA ir netiesioginis ELISA. Pagrindinis skirtumas tarp tiesioginės ir netiesioginės ELISA yra tas, kad netiesioginė ELISA yra jautresnė ir jai reikia pridėti antrinių antikūnų, o tiesioginė ELISA yra mažiau jautri ir naudoja tik pirminius antikūnus.
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindiniai skirtumai
2. Kas yra tiesioginė ELISA
3. Kas yra netiesioginė ELISA
4. Palyginimas greta - tiesioginis ir netiesioginis ELISA
5. Santrauka
Kas yra tiesioginė ELISA?
ELISA yra ligos diagnostinis tyrimas, skirtas nustatyti tam tikrų antigenų ar antikūnų buvimą kraujyje. Tai atliekama kaip plokštelių tyrimas. Jis naudoja antikūnus, susietus su lengvai ištiriamais fermentais. Antigenų buvimas serumo mėginyje jungiasi su specifiniais antikūnais, susietais su fermentais. Paskutiniame etape pridedamas specifinis substratas, kuris reaguoja su fermentu. Fermentas paverčia substratą į spalvotą arba signalą gaminantį produktą. Cheminio substrato spalvos pokytis atskleidžia tam tikro antikūno buvimą serumo mėginyje. Tiesioginiame ELISA teste naudojami tik pirminiai antikūnai, susieti su fermentu. Susijungęs su antigenu, jis greitai keičia spalvą, nurodydamas infekcinio agento buvimą kraujyje. Tačiautiesioginės ELISA metu signalų intensyvumas yra silpnesnis, nes epitopai apsiriboja antigenų surišimu. Taigi tiesioginė ELISA yra mažiau jautri, palyginti su netiesiogine ELISA.
01 pav. Tiesioginis ELISA testas
Kas yra netiesioginė ELISA?
ELISA gali būti atliekama naudojant dviejų tipų antikūnus, būtent; pirminis antikūnas ir antrinis antikūnas. Netiesioginis ELISA įrankis naudoja abiejų tipų antikūnus, kad sustiprintų signalus, kad būtų geriau aptikti. Netiesioginė ELISA technika atliekama taip.
- Plokštės inkubuojamos su antigenais ir plaunamos, kad blokuotų nespecifinį rišimąsi.
- Tada pridedami pirminiai antikūnai ir plaunami.
- Pridedami ir nuplaunami su fermentais susiję antriniai antikūnai.
- Pridedamas substratas ir leidžiama reaguoti su fermentais.
- Aptinkami signalai ir nustatomas konkretaus antigeno buvimas ar nebuvimas mėginyje.
Netiesioginiu ELISA testu keli pirminiai antikūnai gali prisijungti prie vieno pirminio antikūno. Antriniai antikūnai yra susieti su lengvai tiriamais fermentais. Todėl vienas susiejimas gali suteikti stiprų signalą dėl daugiau nei vienos sąveikos. Taigi netiesioginė ELISA yra jautresnė nei tiesioginė ELISA. Tačiau netiesioginė ELISA gali sukelti nespecifinius signalus dėl kryžminių antrinių antikūnų reakcijų.
02 paveikslas: Netiesioginis ELISA testas
Kuo skiriasi tiesioginė ir netiesioginė ELISA?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
Tiesioginė ir netiesioginė ELISA |
|
| Tiesioginė ELISA yra mažiau jautri, palyginti su netiesiogine ELISA. | Netiesioginė ELISA yra jautresnė. |
| Paimtas laikas | |
| Tiesioginis ELISA testas yra greitas procesas. | Netiesioginė ELISA užima daug laiko. |
| Antikūnų naudojimas | |
| Tiesioginiame ELISA tyrime naudojami tik vieno tipo antikūnai (pirminiai antikūnai). | Netiesioginei ELISA analizei naudojami pirminiai ir antriniai antikūnai. |
| Ryšys su fermentais | |
| Pirminiai antikūnai yra susieti su fermentais. | Antriniai antikūnai yra susieti su fermentais. |
| Antrųjų antikūnų kryžminis reaktyvumas | |
| Tiesioginė ELISA pašalina kryžminį antrųjų antikūnų reaktyvumą. | Netiesioginė ELISA paveikiama kryžminiu antrųjų antikūnų reaktyvumu. |
| Signalai | |
| Signalai yra silpni, palyginti su netiesiogine ELISA. | Signalai stiprinami netiesiogine ELISA metodu. Vadinasi, jį lengva aptikti. |
Santrauka - tiesioginė ir netiesioginė ELISA
ELISA yra biocheminė technika, daugiausia naudojama imunologijoje, siekiant nustatyti antikūno ar antigeno buvimą paciento kraujo mėginyje. Tai galima atlikti dviem procesais, vadinamais tiesiogine ar netiesiogine ELISA. Tiesioginiame ELISA teste antigenui nustatyti naudojami tik pirminiai antikūnai, o netiesioginiam - atliekant pirminius ir antrinius antikūnus. Vykdant tiesioginę ELISA, pirminiai antikūnai žymimi, tuo tarpu netiesioginiuose - ELISA - antriniai antikūnai. Tuo skiriasi tiesioginė ir netiesioginė ELISA.
