Pagrindinis skirtumas - popieriaus ir plono sluoksnio ir kolonos chromatografija
Popierinė chromatografija, plonasluoksnė chromatografija ir kolonėlių chromatografija yra trijų tipų chromatografijos metodai. Pagrindinis skirtumas tarp popieriaus chromatografijos, plonasluoksnės chromatografijos ir kolonėlės chromatografijos yra pagrįstas stacionarios fazės, naudojamos chromatografijos technikoje, tipu. Popierinės chromatografijos metu celiuliozės popierius naudojamas kaip stacionari fazė, o plonojo sluoksnio chromatografijoje kaip stacionari fazė yra aliuminio oksidas arba silikagelis, o kolonėlių chromatografijoje stacionari fazė yra kolonėlė, supakuota su tinkama matricos medžiaga.
Biomolekulių, tokių kaip baltymai ir angliavandeniai, atskyrimo ir identifikavimo procese chromatografija yra svarbi naudojama biofizinė technika. Chromatografija atskiria junginius pagal jų tirpumą, dydį ir krūvį. Remiantis atskyrimo mechanizmu, chromatografijoje naudojami tokie mechanizmai kaip jonų mainai, absorbcija, pasiskirstymas ir dydžio išskyrimas, ir yra trys chromatografijos metodai; būtent popieriaus, plono sluoksnio ir kolonėlių chromatografija. Popieriaus chromatografija grindžiama junginio kietojo skysčio adsorbcija ir tirpumu, o stacionari fazė yra celiuliozės popierius. Plonojo sluoksnio chromatografija pagrįsta molekulių adsorbcija kietuoju skysčiu. Ji turi nejudančią fazę, paprastai gaminamą iš aliuminio oksido arba silikagelio, ir judančią fazę, kuri yra tirpiklis. Kolonėlių chromatografijoje naudojama kolonėlė, supakuota su matrica, naudojama molekulėms atskirti, daugiausia atsižvelgiant į jų dydį, afinitetą ar jos krūvį.
TURINYS
1. Chromatografijos apžvalga ir pagrindiniai skirtumai
2. Kas yra popieriaus chromatografija
3. Kas yra plono sluoksnio chromatografija
4. Kas yra kolonėlių chromatografija
5. Popieriaus, plono sluoksnio ir kolonos chromatografijos panašumai
6. Gretimas palyginimas - popierius ir plonas sluoksnis vs Stulpelių chromatografija lentelių pavidalu
. Santrauka
Kas yra popieriaus chromatografija?
Popierinė chromatografija yra paprasčiausia naudojama chromatografijos rūšis ir ji nėra naudojama išsamiems tyrimams. Jis daugiausia naudojamas studentų laboratorijose, siekiant nustatyti biomolekules, tokias kaip mišiniuose esančios amino rūgštys ir angliavandeniai. Popieriaus chromatografijoje naudojama stacionari fazė, kuri gaminama naudojant celiuliozinį popierių arba „Whatman“filtravimo popierių, ir judanti fazė, kuri paprastai paruošiama naudojant organinius tirpiklius, tokius kaip n-butanolis ir kt. Stacionari fazė yra prisotinta vandens, todėl stacionari fazė tampa skysta. Taigi, kai junginiai pastebimi ir jiems leidžiama veikti esant mobiliajai fazei, atsižvelgiant į junginių tirpumą, jie yra atskiriami. Taigi, sukūrus chromatogramą, galima dažyti, kad būtų nustatytas kiekvieno junginio ilgis. Tokiu būdu galima apskaičiuoti sulaikymo koeficientą.
01 paveikslas: popieriaus chromatografija
Popieriaus chromatografija gali būti toliau klasifikuojama kaip kylanti popieriaus chromatografija ir mažėjanti popieriaus chromatografija, priklausomai nuo veikiančio tirpiklio krypties.
Kas yra plono sluoksnio chromatografija?
Plonų sluoksnių chromatografija arba TLC yra dažniausiai naudojama technika, leidžianti nustatyti įvairias mišinyje esančias amino rūgštis arba baltymus. Atskyrimo technika pagrįsta kietojo skysčio adsorbcija. Plonojo sluoksnio chromatografijos metu plokštelė iš aliuminio oksido arba silikagelio naudojama kaip stacionari fazė. Tirpiklio mišinys skiriasi priklausomai nuo reikalavimo, todėl tirpikliui paruošti gali būti naudojami skirtingi organinių junginių, tokių kaip n-butanolis, acto rūgštis ir vanduo, deriniai. Junginiai, kuriuos reikia atskirti, pastebimi ant plokštelės ir panardinami į tirpiklio mišinį. Kai tirpiklis keliauja aukštyn, remdamasis plokštelės suteiktu kapiliariniu poveikiu, plokštelėje pastebėti junginiai taip pat juda, priklausomai nuo jų tirpumo tirpiklyje.
02 paveikslas: plono sluoksnio chromatografija
Dėmės nustatomos po chromatogramos skirtingomis dažymo procedūromis. Kai kurie naudoja ninhidrino dažymą, kuris yra gana toksiškas dažymo būdas. Šiuolaikinėse plono sluoksnio chromatogramose naudojama fluorescencijos technika, kad būtų galima peržiūrėti chromatogramą po bandymo. Atsižvelgiant į nuvažiuotus atstumus, galima apskaičiuoti kiekvieno junginio sulaikymo laiką. Tai gali būti naudojama norint nustatyti junginio tipą, atskirtą pagal naudojamą mišinį. TLC daugiausia naudojamas baltymų mišinyje esančioms aminorūgštims nustatyti ir mišinyje esančių skirtingų monosacharidų tipams atskirti.
Kas yra kolonėlių chromatografija?
Kolonėlių chromatografija yra platus terminas, vartojamas apibūdinti daugelį chromatografijos būdų, kuriuose naudojamas kolonomis pagrįstas atskyrimo metodas. Kolonėlių chromatografijoje junginiams atskirti naudojama fizinė kolonėlė su pakavimo medžiaga. Atskyrimas gali būti pagrįstas skirtingomis junginių fizinėmis savybėmis. Šios savybės gali būti krūvis, dydis, 3D konformacija ir rišimo galimybė ir kt. Taigi, kolonėlė, supakuota su matricos medžiaga, veikia kaip stacionari fazė, o plovimo buferis, pritaikytas kolonai, veikia kaip judanti fazė.
Jei molekulės yra atskirtos pagal dydį, pakavimo medžiaga yra supakuota taip, kad junginiai galėtų palikti poras. Taigi pirmiausia išplaunamos didesnės molekulės, negalinčios tekėti per poras, o mažesnėms - daug ilgiau.
03 paveikslas: kolonėlių chromatografija
Jei molekulės yra atskirtos pagal jų krūvį, stacionarioje fazėje bus arba anijonas, arba katijonas, prie kurio junginiai bus pritraukti pagal jų krūvį. Taigi plovimo etape nesujungti junginiai bus eluuoti. Pridedant eliuavimo buferį, surišti jungiami junginiai bus eluuojami. Šių eliuentų nustatymas dažniausiai grindžiamas spektrofotometriniais metodais.
Kokie yra plono popieriaus sluoksnio ir kolonos chromatografijos panašumai?
- Biomolekulių, tokių kaip aminorūgštys, baltymai ir angliavandeniai, atskyrimui naudojami visi trys plono sluoksnio ir kolonos chromatografijos metodai.
- Plono popieriaus sluoksnių ir kolonų chromatografijos metodai turi judamąją ir nejudančiąją fazes.
- Plonų popieriaus sluoksnių ir kolonų chromatografijos metodai atskyrimui naudoja biofizinius mechanizmus.
Kuo skiriasi plonas popieriaus sluoksnis ir kolonos chromatografija?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
Popieriaus ir plono sluoksnio ir kolonos chromatografija |
|
| Popierinė chromatografija | Popierinė chromatografija yra chromatografijos metodas, naudojamas junginiams atskirti, remiantis skysčio ir skysčio adsorbcija ir junginio tirpumu. Stacionarioje fazėje jis naudoja celiuliozės popierių. |
| Plonojo sluoksnio chromatografija | Plonasluoksnė chromatografija yra dar viena chromatografijos technika, pagrįsta kietųjų skysčių adsorbcija molekulėse. Ji turi nejudančią fazę, pagamintą iš aliuminio oksido arba silikagelio, ir judančią fazę - tirpiklį. |
| Stulpelių chromatografija | Kolonėlių chromatografijoje naudojama kolonėlė, supakuota su matrica, naudojama molekulėms atskirti, daugiausia atsižvelgiant į jų dydį, afinitetą ar jos krūvį. |
| Stacionarus etapas | |
| Popierinė chromatografija | Popierius, pagamintas iš Whatmano nitroceliuliozės, naudojamas kaip stacionari fazė popieriaus chromatografijoje. |
| Plonojo sluoksnio chromatografija | Aliuminio oksidas arba silicio dioksidas naudojamas kaip stacionarioji plonasluoksnės chromatografijos fazė. |
| Stulpelių chromatografija | Kolonėlė, supakuota su tinkama pakavimo medžiaga, naudojama kaip stacionari fazė kolonėlių chromatografijoje. |
| Mobilusis etapas | |
| Popierinė chromatografija | Bėgantis tirpiklis yra judanti popieriaus chromatografijos fazė. |
| Plonojo sluoksnio chromatografija | Bėgimo tirpiklis yra plonasluoksnės chromatografijos judamoji fazė. |
| Stulpelių chromatografija | Plovimo buferis yra judanti kolonos chromatografijos fazė. |
| Atskyrimui naudojami mechanizmai | |
| Popierinė chromatografija | Popierinė chromatografija pagrįsta kietojo skysčio absorbcija. |
| Plonojo sluoksnio chromatografija | Plonojo sluoksnio chromatografija pagrįsta kietojo skysčio absorbcija. |
| Stulpelių chromatografija | Kolonėlių chromatografija pagrįsta dydžio išskyrimu, krūviu ir forma. |
| Eliucijos buferis | |
| Popierinė chromatografija | Nereikalaujama pagal popieriaus chromatografiją. |
| Plonojo sluoksnio chromatografija | Plonasluoksnei chromatografijai nereikia. |
| Stulpelių chromatografija | Reikalinga kolonėlių chromatografijoje. |
| Aptikimas | |
| Popierinė chromatografija | Dažymas ir nustatant išlaikymo faktorių. |
| Plonojo sluoksnio chromatografija | Dažymas ir nustatant išlaikymo faktorių. |
| Stulpelių chromatografija | Spektrofotometrinis nustatymas. |
Santrauka - popieriaus plonasluoksnis ir kolonos chromatografija
Popierinė chromatografija, TLC ir kolonėlių chromatografija yra atskyrimo metodai, naudojami atskiriant biomolekules, tokias kaip baltymai, aminorūgštys ir angliavandeniai (daugiausia monosacharidai). Popieriaus chromatografijoje celiuliozinis popierius naudojamas kaip stacionari fazė, o atskyrimo mechanizmas pagrįstas kietojo skysčio adsorbcija. TLC taip pat naudojami kietojo skysčio adsorbcijos mechanizmai. Molekulės yra atskiriamos stacionarioje fazėje, priklausomai nuo jų tirpumo judriojoje fazėje. Kolonėlinė chromatografija išskiria junginio fizikines savybes, tokias kaip dydis, forma, krūvis ir molekulinė masė. Kolonėlė, supakuota su matricos medžiaga, veikia kaip stacionari fazė, o plovimo buferis - kaip tirpiklio fazė. Tai skirtumas tarp plono popieriaus sluoksnio ir kolonos chromatografijos.
