Pagrindinis skirtumas - horizontalaus ir vertikalaus gelio elektroforezė
Elektroforezė su geliu yra laboratorijos metodas, naudojamas genetikoje atskirti mišinius, kuriuose yra DNR, RNR ir kitų baltymų, atsižvelgiant į jų atitinkamą krūvį ir molekulinį dydį. DNR, RNR ar baltymai, kuriuos reikia atskirti šiuo metodu, yra paleidžiami per gelį, kuriame yra mažų porų. Molekules elektrinis laukas varo per gelį. Molekulės praeina per gelio poras, o judėjimo greitis yra atvirkščiai proporcingas jų atitinkamam ilgiui. Todėl mažesnio molekulinio dydžio molekulės judės greičiau nei molekulės, turinčios didesnę molekulinę masę. Elektrinį lauką sukuria krūvio skirtumas dviejuose gelio galuose. Viename gale yra teigiamas, o kitame - neigiamas. Kadangi DNR ir RNR molekulės yra neigiamai įkrautos,jie bus pritraukti link teigiamai įkrauto gelio galo. Gelio elektroforezė gali būti dviejų skirtingų metodų: horizontalios gelio elektroforezės ir vertikalios gelio elektroforezės. Vykdant horizontalią gelio elektroforezę, gelis yra horizontalioje padėtyje ir yra panardinamas į nepertraukiamai bėgantį buferį, kuris yra pačios gelio dėžutės viduje. Vertikalios gelio elektroforezės metu buferinė sistema yra orientuota vertikaliai ir yra pertraukiama, kai dvi kameros yra atitinkamai viršuje ir apačioje su katodu ir anodu. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp horizontalios ir vertikalios gelio elektroforezės.gelis yra horizontalioje padėtyje ir yra panardinamas į nepertraukiamai bėgantį buferį, kuris yra pačios gelio dėžutės viduje. Vertikalios gelio elektroforezės metu buferinė sistema yra orientuota vertikaliai ir yra pertraukiama, kai viršuje ir apačioje yra dvi kameros, atitinkamai su katodu ir anodu. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp horizontalios ir vertikalios gelio elektroforezės.gelis yra horizontalioje padėtyje ir yra panardinamas į nepertraukiamai bėgantį buferį, kuris yra pačios gelio dėžutės viduje. Vertikalios gelio elektroforezės metu buferinė sistema yra orientuota vertikaliai ir yra pertraukiama, kai viršuje ir apačioje yra dvi kameros, atitinkamai su katodu ir anodu. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp horizontalios ir vertikalios gelio elektroforezės.
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindinis skirtumas
2. Kas yra horizontali gelio elektroforezė
3. Kas yra vertikali gelio elektroforezė
4. Horizontaliosios ir vertikaliosios gelio elektroforezės panašumai
5. Šoninis palyginimas - horizontalios ir vertikalios gelio elektroforezės lentelės forma
6. Santrauka
Kas yra horizontali gelio elektroforezė?
Horizontalioje gelio elektroforezėje naudojama pagrindinė DNR, RNR ar baltymų molekulių atskyrimo teorija pagal jų atitinkamą molekulių dydį ir krūvį. Taikant šią techniką, gelis yra horizontalioje padėtyje ir yra panardinamas į nuolatinį buferį. Agarozės gelis naudojamas atskirti gelio dėžutę į du skyrius. Viename gelio dėžutės gale yra anodas, o kitame - katodas. Kai naudojama srovė, šioje technikoje naudojamas buferis leidžia sukurti įkrovos gradientą. Užpildžius kremą, gelis linkęs kaisti. Buferis taip pat veikia kaip aušinimo skystis, palaikantis optimalią temperatūrą. Recirkuliuojant bėgantį buferį, neleidžia susidaryti pH gradientas. Nepertraukiamo buferio sistema negali būti naudojama horizontalioje gelio elektroforezėje, nes du gelio sistemos skyriai sujungiami su veikiančiu buferiu. Akrilamidas naudojamas elektroforezės metu geliui atskirti baltymų mišinius.
01 pav. Horizontaliosios gelio elektroforezė
Vykdant horizontalią gelio elektroforezę, akrilamidas negali būti naudojamas, nes gelio dėžutė veikiama deguonies. Dėl deguonies slopinimo akrilamido polimerizacija yra slopinama, o tai trukdo formuotis geliui. Horizontali gelio elektroforezė yra lengvas metodas, naudojamas atskiriant DNR ir RNR.
Kas yra vertikali gelio elektroforezė?
Vertikaliosios gelio elektroforezės technika veikia pagal pirminę gelio elektroforezės teoriją, tačiau laikoma, kad ji yra sudėtingesnė už horizontalios gelio elektroforezės metodą. Ši technika naudoja nenutrūkstamą buferį. Katodas yra viršutinėje kameroje, o anodas - apatinėje. Kiekviename skyriuje esantys elektrodai suteikia reikiamą elektrinį lauką. Tarp dviejų sumontuotų stiklo plokščių pilamas plonas gelio sluoksnis. Todėl viršutinė gelio dalis panardinama į viršutinę kamerą, o apatinė gelio dalis - į apačioje esančią kamerą. Įjungus srovę, nedidelė buferio dalis per viršutinę kamerą per gelį juda į apatinę kamerą. Šioje technikoje naudojama srovė yra minutės vienetai.
02 paveikslas: Vertikali gelio elektroforezė
Vertikalios gelio elektroforezės metu buferis teka tik per gelį. Tai leidžia tiksliai valdyti įtampos gradientą atskyrimo etape. Galima naudoti akrilamido gelį, nes kameros nėra veikiamos atmosferos deguonies. Dėl mažesnio akrilamido gelio porų dydžio galima tiksliai atskirti naudojant didesnę skiriamąją gebą.
Kokie yra horizontaliosios ir vertikaliosios gelio elektroforezės panašumai?
- Abi sistemos veikia pagal pagrindinę gelio elektroforezės teoriją.
- Anodas ir katodas naudojami reikiamam elektriniam laukui tiekti abiejose sistemose.
Koks skirtumas tarp horizontalios ir vertikalios gelio elektroforezės?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
Horizontali ir vertikali gelio elektroforezė |
|
| Horizontali gelio elektroforezė yra gelio elektroforezės technika, kai gelis yra horizontaliai orientuotas. | Vertikali gelio elektroforezė yra gelio elektroforezės technika, kai gelis yra orientuotas vertikaliai. |
| Buferis | |
| Horizontali gelio elektroforezė susideda iš ištisinio buferio. | Vertikalios gelio elektroforezės metu veikiantis buferis yra pertraukiamas. |
| Akrilamido naudojimas | |
| Akrilamidas negali būti naudojamas horizontaliai gelio elektroforezei, nes gelio dėžutė veikiama atmosferos deguonies. | Kadangi gelis nėra veikiamas atmosferos deguonies dėl dviejų atskirų kamerų, akrilamidas gali būti naudojamas vertikaliai gelio elektroforezei. |
| Funkcija | |
| Horizontali gelio elektroforezė dažniau naudojama atskiriant DNR ir RNR mišinius, bet ne baltymus. | Baltymų mišiniams atskirti naudojama vertikali gelio elektroforezė. |
Santrauka - horizontalaus ir vertikalaus gelio elektroforezė
Gelio elektroforezė yra laboratorinė technika, plačiai naudojama atskiriant mišinius, kuriuose yra DNR, RNR ir baltymų molekulių. Yra du gelio elektroforezės metodai: horizontali ir vertikali gelio elektroforezė. Vykdant horizontalią gelio elektroforezę, bėgimo buferis yra nepertraukiamas, o vertikalios gelio elektroforezės metu jis yra nenutrūkstamas. Tuo skiriasi horizontali ir vertikali gelio elektroforezė. Abi sistemos veikia pagal bendrą gelio elektroforezės principą.
Atsisiųskite horizontalios ir vertikalios gelio elektroforezės PDF versiją
Galite atsisiųsti šio straipsnio PDF versiją ir naudoti ją neprisijungus, kaip nurodyta citatos pastaboje. PDF versiją atsisiųskite čia. Skirtumas tarp horizontalios ir vertikalios gelio elektroforezės.
