Pagrindinis skirtumas - kapiliarinė elektroforezė ir gelio elektroforezė
Elektroforezė yra technika, naudojama atskirti biomolekules pagal dalelių krūvį, dalelių dydį ir dalelių formą. Molekulės, vadinamos elektroforetiniu judrumu, migracija priklauso nuo naudojamo polimero / gelio tipo, jo porų dydžio, suteikiamos įtampos, veikimo laiko ir paviršiaus bei tūrio santykio. Yra įvairių rūšių elektroforezės metodai, atsižvelgiant į naudojamos biomolekulės tipą. Pirmasis išrastas elektroforezės tipas buvo popieriaus elektroforezė, kai nitroceliuliozės popierius buvo naudojamas kaip terpė biomolekulėms atskirti. Gelio elektroforezės principas, kai biomolekulėms atskirti buvo naudojami skirtingo porų dydžio geliai, buvo išrastas vėliau. Gelio elektroforezės technika buvo dar modifikuota, siekiant pagerinti technikos tikslumą, ir viena iš tokių modifikacijų yra kapiliarinė elektroforezė. Pagrindinis skirtumas tarp kapiliarinės elektroforezės ir gelio elektroforezės yra tas, kad gelio elektroforezė atliekama vertikalioje arba horizontalioje plokštumoje, naudojant standartinio porų dydžio polimerinį gelį, o kapiliarinė elektroforezė atliekama kapiliariniame vamzdelyje su polimero skysčiu arba geliu.
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindinis skirtumas
2. Kas yra gelio elektroforezė
3. Kas yra kapiliarinė elektroforezė
4. Kapiliarinės elektroforezės ir gelio elektroforezės panašumai
5. Šoninis palyginimas - kapiliarinės elektroforezės ir gelio elektroforezės lentelės forma
6. Santrauka
Kas yra gelio elektroforezė?
Gelio elektroforezė yra technika, naudojama atskiriant daugiausia nukleorūgštis, baltymus ar aminorūgštis, atsižvelgiant į jos krūvį, dydį ir formą. Šioje technikoje kaip atskyrimo terpė naudojamas fizinis gelis, kuris yra polimero medžiaga. Dažniausiai naudojami geliai yra agarozė (nukleino rūgštims atskirti) ir poliakrilamidas (baltymams atskirti). Gelio elektroforetiniame aparate yra gelio liejimo dėklas gelio paruošimui, liejimo šukos šuliniams paruošti, buferinė talpa, elektrodai - teigiami (anodas) ir neigiami (katodas) bei įtampos tiekimo blokas. Neigiamai įkrautos tokios molekulės kaip DNR ar RNR juda iš katodo į anodą, o teigiamai įkrautos - atvirkščiai. Gelio paruošimas atliekamas pagal reikalavimą. Jei reikia didelės skiriamosios gebos arba atskirti molekules,turėtų būti paruoštas didelės koncentracijos gelis su mažesniu porų dydžiu. Gelio matricoje atskirtos molekulės stebimos atlikus dažymo metodiką. Atskirtos molekulės atrodo kaip juostos ant gelio matricos.
01 paveikslas: Gelio elektroforezė
Gelio elektroforezė naudojama molekulinėje diagnostikoje, pavyzdžiui, DNR pirštų atspauduose, siekiant nustatyti konkretaus DNR / RNR fragmento ar baltymo buvimą. Gelio elektroforezė taip pat lemia ekstrahuoto biomolekulės mėginio grynumą. Gelio elektroforezė atliekama kaip išankstinis inbridacijos ir hibridizacijos etapas ir kaip patvirtinamoji analizė po sekvenavimo.
Kas yra kapiliarinė elektroforezė?
Kapiliarinė elektroforezė yra gelio elektroforezės modifikacija, naudojant tą patį atskyrimo principą, pagrįstą krūviu, molekulės dydžiu, tačiau atliekama kapiliariniame vamzdelyje su gelio medžiaga arba skystu polimeru. Kapiliarai yra paruošti iš lydyto silicio dioksido, o kiekvieno kapiliarinio vamzdelio vidinis skersmuo yra 50-100μm ir ilgis 25-100 cm. Mėginiai suleidžiami į kapiliarinį vamzdelį, kuriame yra polimero medžiagos, ir yra atskiriami daug greičiau nei įprasta gelio elektroforezė. Kapiliarinė sistema yra gerai apsaugota izoliatoriaus apvalkalo viduje, kuris apsaugo mėginį nuo bet kokio užteršimo. Kapiliarai gali būti užpildyti skystais polimerais, tokiais kaip hidroksietilceliuliozė, arba didelės skiriamosios gebos geliais, tokiais kaip poliakrilamidas. Kapiliarinė elektroforezė suteikia didesnę skiriamąją gebą; taigi atskyrimas yra tikslesnis. Kapiliarinė elektroforezė naudoja automatizuotą detektorių sistemą, atliekant spektrofotometrinę analizę. Taip yra dėl didesnio paviršiaus ploto ir tūrio santykio.
02 pav. Kapiliarinė elektroforezė
Kapiliarinė elektroforezė naudojama tokiose situacijose kaip teismo ekspertizė, kur reikalingas didesnis tikslumas ir ji dažniausiai nėra naudojama, nes tai yra brangi technika.
Kokie yra kapiliarinės elektroforezės ir gelio elektroforezės panašumai?
- Molekulių atskyrimas abiem metodais pagrįstas molekulės krūviu ir dydžiu.
- Abi technologijos gali būti naudojamos atskiriant ir nukleorūgštis, ir baltymus.
- Abiejų metodų mėginio tūris yra vienodas.
- Abiejuose metoduose naudojamas buferis, kad būtų lengviau atsiskirti.
Koks skirtumas tarp kapiliarinės elektroforezės ir gelio elektroforezės?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
Kapiliarinė elektroforezė ir gelio elektroforezė |
|
| Kapiliarinė elektroforezė yra technika, atskirianti biomolekules ant kapiliarinio vamzdelio, naudojant skystą arba gelio polimero terpę. | Gelio elektroforezė yra technika, atskirianti biomolekules vertikalioje ar horizontalioje plokštumoje, naudojant polimerinę gelio terpę. |
| Atsiskyrimas | |
| Atliekant kapiliarinę elektroforezę, atskyrimas atliekamas kapiliarinio vamzdelio viduje. | Gelio elektroforezėje atskyrimas atliekamas vertikalioje arba horizontalioje plokštumoje. |
| Atsiskyrimo terpė | |
| Skysti polimerai, tokie kaip hidroksietilceliuliozė, naudojami kapiliarų elektroforezėje. | Geliai, arba agarozė, arba poliakrilamidas, naudojami kaip terpė elektroforezės metu. |
| Kryžminis ryšys | |
| Didelę skiriamąją gebą galima gauti atliekant kapiliarinę elektroforezę. | Gelio elektroforezės skiriamoji geba yra maža. |
| Paviršiaus ploto ir tūrio santykis | |
| Kapiliarinės elektroforezės metu paviršiaus ir tūrio santykis yra didelis. | Gelio elektroforezėje paviršiaus ir tūrio santykis yra mažas. |
| Aptikimo technika | |
| Aptikimas atliekamas naudojant automatinius spektrofotometrinius detektorius atliekant kapiliarinę elektroforezę. | Dažymas ir stebėjimas naudojant UV transiliuminatorių atliekami kaip gelio elektroforezės nustatymo metodai. |
Santrauka - kapiliarinė elektroforezė ir gelio elektroforezė
Molekulinė diagnostika vaidina svarbų vaidmenį mokslo pasaulyje. DNR, RNR ir baltymų identifikavimas ir valymas yra kritiniai diagnostikos procedūrų etapai. Elektroforezė yra metodas, kuris atskiria ir identifikuoja biomolekules tiek elektroforezėje gelyje, tiek daug pažengusioje kapiliarinio gelio elektroforezėje. Gelio elektroforezė atliekama vertikalioje arba horizontalioje plokštumoje, naudojant standartinio porų dydžio polimerinį gelį, o kapiliarinė elektroforezė atliekama kapiliariniame vamzdelyje su polimero skysčiu arba geliu. Tuo skiriasi kapiliarinė elektroforezė ir gelio elektroforezė. Užbaigus elektroforezės metodiką, biomolekulės yra toliau apdorojamos, kad gautų aukštesnio lygio informaciją hibridizacijos būdu arba tokiomis technologijomis kaip pirštų atspaudai.
Atsisiųskite kapiliarinės elektroforezės ir gelio elektroforezės versiją
Galite atsisiųsti šio straipsnio PDF versiją ir naudoti ją neprisijungus, kaip nurodyta citatos pastaboje. Atsisiųskite PDF versiją čia Skirtumas tarp gelio elektroforezės ir kapiliarinės elektroforezės.
