Pagrindinis skirtumas - laikinas ir stabilus transfekcija
Transfekcija yra procesas, susijęs su eukariotinių ląstelių genų perkėlimu, naudojant cheminius ar fizinius metodus. Transfekciją galima suskirstyti į du pagrindinius tipus, vadinamus trumpalaikiu transfekcija ir stabilia transfekcija. Trumpalaikės transfekcijos metu dominantis genas negali integruotis su šeimininko genomu ir yra trumpai išreikštas laike šeimininke, tuo tarpu esant stabiliai transfekcijai, dominantis genas integruojasi į šeimininko genomą ir yra palaikomas ilgą laiką keliose kartose. Tai yra pagrindinis skirtumas tarp trumpalaikės ir stabilios transfekcijos. Abiem atvejais transfekcija yra sėkminga, o genai yra išreikšti.
TURINYS
1. Apžvalga ir pagrindiniai skirtumai
2. Kas yra laikina transfekcija
3. Kas yra stabili transfekcija
4. Gretimas palyginimas - laikinas ir stabilus transfekcija
5. Santrauka
Kas yra laikina transfekcija?
Transfekcija yra svarbi priemonė įterpiant genus į eukariotines ląsteles. Tarp dviejų transfekcijos tipų pereinamoji transfekcija yra įprastas genų perkėlimo būdas. Per vektorių svetimi genai transformuojami ląstelių-šeimininkų viduje. Kai svetima DNR patenka į ląstelę-šeimininkę, ji turi dvi galimybes. Jis gali arba integruotis su šeimininko genomu ir daugintis, arba likti viduje, neintegruodamasis į genomą. Laikina transfekcija rodo laikiną įterptų genų išraišką, neintegruojantis į šeimininko genomą. Genai ekspresuoja ir gamina koduotą baltymą, kol ląstelė dalijasi. Tačiau dėl integracijos nesugebėjimo ji negali kartotis ir ateiti į ateinančias kartas. Šio tipo transfekcija yra sėkminga trumpą laiką. Ląstelių dalijimosi metu arba dėl kai kurių kitų veiksnių, pašalinė DNR yra skaidoma. Laikina transfekcija rodoma, kai svetima DNR yra labai susivyniojusios DNR formos.
01 paveikslas: Laikinas transfekcija
Kas yra stabilus transfekcija?
Stabili transfekcija rodo sėkmingą užsienio genų integraciją į šeimininko genomą. Kai svetima DNR patenka į ląstelės-šeimininkės vidų, dalis svetimos DNR integruojasi su šeimininko genomu ir tampa jo dalimi. Taigi svetima DNR taip pat dauginasi ir pereina į ateinančias kartas, kai šeimininko genomas pakartojasi. Šis transfekcijos tipas yra sudėtingas ir retas. Tačiau dėl stabilios transfekcijos į genomą šis bruožas išlieka ilgesnį kelių kartų laikotarpį.
Stabili transfekcija yra sunkus procesas, reikalaujantis efektyvaus DNR pristatymo ir ląstelių pašalinės DNR įsigijimo į savo genomą. Taigi, linijinė DNR palaiko stabilią transfekciją nei žiedinė DNR. Tačiau stabilus transfekcijos greitis yra maždaug vienas iš 10 4 transformuotų ląstelių. Stabilią transfekciją galima stebėti atliekant pasirinkto žymens kotransfomaciją ir atliekant dirbtinę atranką terpėje.
02 pav. Stabilus transfekcija
Kuo skiriasi pereinamasis ir stabilus transfekcijos?
Skirtingas straipsnis viduryje prieš lentelę
Laikinas ir stabilus transfekcija |
|
| Svetima DNR neintegruojama į šeimininko genomą. | Svetima DNR integruojasi su šeimininko genomu ir tampa jo dalimi. |
| Replikavimas pagrindiniame kompiuteryje | |
| Laikinai transfekuoti genai nesikartoja šeimininko viduje. Todėl genai nėra perduodami kitoms kartoms. | Genai dauginasi šeimininke ir perduodami ateities kartoms. |
| Genų raiškos trukmė | |
| Genai yra išreikšti ribotą laiką, o po to jie sunaikinami. | Genai tampa genomo dalimi ir ilgą laiką pasireiškia kartos viduje. |
| Naudokite | |
| Tai naudinga tiriant trumpalaikės genų ar genų produktų raiškos poveikį. | Tai naudinga tiriant genų raiškos poveikį ilgalaikiam poveikiui. |
| Transfekcijos nustatymas | |
| Genai yra ekspresuojami ir juos galima lengvai aptikti įterpus reporterio geną. | Stabilią transfekciją galima lengvai aptikti įterpiant pasirenkamą žymeklį ir pasirenkant per dirbtinį pasirinkimą terpėje. |
| Įvykis ir procesas | |
| Laikina transfekcija yra įprasta ir ją atlikti nėra sudėtinga. | Stabili transfekcija pasitaiko retai ir ją atlikti sudėtinga. |
| DNR pobūdis | |
| Trumpalaikiai transfekcijai tinka labai supervyniota DNR. | Linijinė DNR yra tinkama stabiliai transfekcijai. |
| Programos | |
| Tai naudojama tiriant genų nukenksminimą ar nutildymą slopinančiomis RNR, baltymų gamybą nedideliu mastu | Tai naudojama baltymų gamybai atliekant plataus masto ilgalaikius farmakologinius tyrimus, genų terapiją, ilgalaikio genetinio reguliavimo mechanizmų tyrimus |
Santrauka - trumpalaikis ir stabilus transfekcija
Laikinos ir stabilios transfekcijos yra dviejų tipų transfekcijos, parodomos genams perduodant į eukariotines ląsteles ne virusinėmis sistemomis. Transformuota svetima DNR nėra integruota su šeimininko genomu trumpalaikės transfekcijos metu, o ji integruojasi su šeimininko genomu stabilios transfekcijos metu. Apskritoje suvyniotoje DNR parodyta trumpalaikė transfekcija, o linijinė DNR teikia pirmenybę stabiliai transfekcijai. Tai skirtumas tarp trumpalaikės ir stabilios transfekcijos. Tačiau trumpalaikė transfekcija yra dažnesnė ir lengvesnė, palyginti su stabilia transfekcija. Bet vieno iš dviejų pasirinkimas priklauso nuo genų perkėlimo tikslo ir tyrimo projekto trukmės.
